规模化牛场奶牛衣原体和布鲁菌病相关抗体的检测分析*

　　摘要：为检测并分析银川地区规模化牛场牛衣原体和布鲁菌病的相关抗体，采用鹦鹉热衣原体McAb-ELISA方法和布鲁菌虎红平板凝集试验（RBPT）方法进行特异性检测，应用McAb-ELISA方法与传统的IHA试验方法分别对同样50份待检牛血清进行衣原体抗体的比较检测。结果表明，银川地区的16个牛场1161份牛血清衣原体总的阳性率为9.22%。布鲁菌的血清阳性率为13.26%。对50份牛血清采用2种试验方法同时进行衣原体抗体检测，ELISA阳性检出率为32％，IHA为24%。McAb-ELISA比IHA的特异性强。

　　关键词：鹦鹉热衣原体；布鲁菌病；血清；人兽共患病

　　衣原体病是由鹦鹉热衣原体所引起的各种畜禽及人类共患的传染病[1]。牛衣原体病是由鹦鹉热衣原体（Chlamydiapsittaci）感染牛引起的一种多症状性传染病,主要表现为妊娠母牛流产、死产和产弱犊；新生牛多发生肺炎、肠炎、多发性关节炎、脑炎和结膜炎；种公牛发生睾丸炎等[2]。人感染鹦鹉热衣原体后，症状和体征变化多端，有人呈隐性无症状感染，有人呈持续性感染伴有临床症状，如发热、剧烈头痛、皮疹、腹泻、呕吐、肝炎、心肌炎和脾肿大等。

　　布鲁菌病（Brucellosis）是由布鲁氏杆菌所引起的一种以胎盘炎和流产为特征的急性或慢性家畜传染病，以引起动物流产、不孕等生殖障碍性疾病为主要特点[3]。人是通过直接或间接途径与感染的家畜（主要是牛、猪、羊）接触而患病，患病后缺乏特异症状和体征。布鲁菌根据感染动物种类不同分为6个不同的种，牛布鲁菌是其中之一。

　　近年来，在我国银川地区一些奶牛场相继出现了以奶牛流产为特征的一种传染性疾病，为了查清该病的原因，摸清人畜间的疾病流行关系。首先对银川地区的16个奶牛场进行了随机采血，进行了衣原体和布鲁菌病的血清学检测，现将检测结果报告如下。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　1.1.1抗鹦鹉热衣原体McAb由课题组研制，并进行特异性检测。

　　1.1.2鹦鹉热衣原体抗原按文献[1]方法自制。

　　1.1.3鹦鹉热衣原体标准阳性血清由中国农业科学院兰州兽医研究所提供，批号为050519，IHA效价在1∶256以上。

　　1.1.4鹦鹉热衣原体标准阴性血清由中国农业科学院兰州兽医研究所提供，批号为050519。

　　1.1.5鹦鹉热衣原体IHA抗原由中国农业科学院兰州兽医研究所提供，批号为050525。

　　1.1.6布鲁菌虎红平板凝集抗原由中国CDC传染病所提供，批号为200504。

　　1.1.7被检血清采自银川及周边地区16个牛场共1161份血清,冻结备用。

　　1.2方法

　　1.2.1鹦鹉热衣原体McAb-ELISA方法用pH9.6碳酸盐缓冲液将McAb100倍稀释后包被于40孔酶标板100μL／孔，置4℃过夜，加10％脱脂乳100μL／孔,封闭,置37℃作用1h；用PBS-T缓冲液洗板3次，加入100倍稀释的衣原体已知抗原100μL／孔，置37℃1h，用PBS-T缓冲液洗板3次，加入1∶5倍待检血清100μL／孔,置37℃1h，用PBS-T缓冲液洗板3次；加驴抗羊、兔抗猪和兔抗牛IgG辣根过氧化物酶结合物100μL／孔；置37℃1h，用PBS-T缓冲液洗板3次；加邻苯二胺底物缓冲液100μL／孔，显色30min；加50μL／孔2mol/LH2SO4终止反应。测OD490nm值。同时设阴性，阳性血清和空白对照，结果判定OD值≥0.18时判为阳性。

　　1.2.2鹦鹉热衣原体IHA试验方法按中国农业科学院兰州兽医研究所提供的检测方法进行。判定标准按诊断液标明的标准（抗体效价达到或超过1∶64判为阳性）进行。

　　1.2.3McAb-ELISA方法与IHA试验方法的比较应用两种方法分别对同样50份待检牛血清进行衣原体抗体的比较检测。

　　1.2.4布鲁菌虎红平板凝集试验从样品血液分离血清，吸取30μL滴于洁净玻璃板上，加入30μL虎红平板凝集抗原，混匀后4min观察结果，出现肉眼可见的凝集，判为阳性（+）；无凝集的判为阴性（-）。

　　2.1衣原体ELISA和IHA的比较结果

　　对随机抽取的50份牛血清采用2种试验方法同时进行检测，牛血清ELISA阳性检出率为32％（16/50），IHA为24%（12/50），前者比后者高6%。

　　2.2衣原体和布鲁菌病检测结果

　　应用研制的抗鹦鹉热衣原体McAb[1]检测16个规模化牛场，在被检血清中衣原体和布鲁菌病结果见表1。

　　由表1可以看出衣原体1161份血清中总的阳性率为9.22%,最高的阳性率达到了53.1%（68/128）,最低为0%。检测牛场的阳性率为68.75%（11/16）。

　　1161份血清中布鲁菌病总的阳性率为13.26%,最高的阳性率达到了37.5%（3/8）,最低为0%。检测牛场的阳性率为56.25%（9/16）。

　　2.3在被检的16个牛场1161份牛血清中有4个牛场的9头牛血清中衣原体和布鲁菌检测均为阳性,阳性率为0.78%（9/1161）。