尿素尿素酶试验胃镜呼气试验涂片幽门螺杆菌检测免疫印迹技术腹部平片尿常规血常规便常规
Hp的诊断方法有多种,主要分为两大类:直接法和间接法。
1.细菌的直接检查
用培养,PCR,组织学方法直接检测胃黏膜内的Hp。
(1)培养法:通过胃镜 钳取胃窦黏膜作Hp培养是最精确的诊断方法,可作为验证其他诊断性试验的金标准,此外,还可提供细菌的药物敏感试验,指导临床选用药物,尤其是治疗失败者或生活在Hp耐药性很高的国家与地区,Hp培养法特点是特异性高,但敏感性居中,操作技术难,耗费时间较长,培养需3~6天,即使是有经验的实验师操作,培养成功率也仅达75%~95%,影响Hp生长,造成假阴性结果的因素有许多,如培养标本不含Hp;胃镜检查时吞咽表面麻醉剂;活检钳污染;或最近使用过抗生素或铋剂,这些均能抑制细菌生长,此外标本接种时间与分离培养基是否新鲜也有关。
最近报道从人的粪便中也可培养出Hp,但需在微氧的环境下离心,浓缩细菌而获得,因为目前只能在50%Hp定植患者的粪便中检出,所以对此非侵袭方法尚需作进一步研究。
(2)组织切片法:另一种Hp的直接检查法,能提供组织形态学的信息,因为Hp定居在人胃黏液的黏液下层,上皮细胞表面,正常情况下该部位不存在其他细菌,因此根据在组织切片上的形态特点和分布特征 (在胃黏液和胃腔之间存在螺旋杆菌状物),即可诊断Hp感染,是较可靠的方法,组织学检查特点是敏感性高,可同时做病理检查,并可永久保存资料,染色方法很多,包括HE染色,Gram染色,碳酸复红染色,W-S(Warthin-Starry)染色,Giemsa(吉姆萨)染色等,革兰染色,因检出率低几乎已不用;标准HE染色能检出Hp,但也不是可靠的方法,W-S银染是很好的技术,尽管价格和技术要求高,由于检测有效,临床应用较为普遍,吉姆萨染色费用较少,一些作者认为此方法在质量上与W-S银染相等。
除常规的组织学检查外,还有免疫化学和免疫荧光方法,但需使用免疫荧光镜和免疫抗体,使检查变得更昂贵,且又不能提供常规组织学发现以外的信息,因而不能常规使用,多用于实验室研究。
(3)直接涂片 染色:用相差显微镜直接检查涂于玻片上的胃黏液中Hp,可用吖啶橙染色,革兰染色,Giemsa染色。
(4)PCR(聚合酶联反应):PCR是检测Hp是否存在另一种方法,特点是即能快速检测到新鲜胃黏液标本中的Hp,也能检测石蜡包埋的活检样本,PCR的引物对所有Hp菌株是特异的,故具有高度特异性,和快速尿素 酶,培养法和组织学比较,PCR又具有高度敏感性,但一些隐匿的因素能影响此高度的敏感性和特异性,如内镜和活检钳清洗,消毒不严导致DNA污染,使特异性降低,使敏感性降低的因素有细菌在胃黏膜的斑块状定植或PCR抑制因素的存在,PCR可用于Hp感染的临床诊断,流行病学调查,Hp的分子遗传学研究。
2.细菌的间接检查
利用细菌的生物特性,特别是Hp水解尿素的能力而产生呼气试验 ,尿素酶试验 ,血清学因不能提供细菌当前是否存在的依据,故不能用于目前感染的诊断,主要用于筛选或流行病学调查,对临床医师来说,根据医院的条件,选择合适的方法用于病人是重要的,目前主要采用联合方法诊断。
(1)快速尿素酶试验:因Hp是人胃内惟一能够产生大量尿素酶的细菌,故可通过检测尿素酶来诊断Hp感染,尿素酶分解胃内的尿素生成氨和二氧化碳,使尿素浓度降低,氨浓度升高,基于此原理,已发展了多种检测方法。
胃黏膜活检组织快速尿素酶试验为目前临床应用最广泛的一种方法,具有简便,实用快速,灵敏等优点,但受细菌数量影响,活检组织中Hp数量很少时,易出现假阴性;在使用铋剂,氨苄西林,甚至H2受体拮抗药治疗后,尿素酶试验的敏感性明显降低,故此方法主要用于最初检测Hp感染,目前所用的方法有如下两种。
①pH指示剂法:试剂中含有尿素和pH指示剂(如酚红pH 6.8时为黄棕色,pH 8.4时为粉红色),从胃内取出的标本通常呈酸性(pH<6.0),一般情况下试剂的颜色不变,如果胃内有Hp感染,当黏膜标本放入试剂中,Hp所产生的尿素酶则分解尿素产生氨,使pH值升高,试剂变为粉红色。
②分析化学法:采用分析化学原理检测Hp尿素酶的最终产物,由于阳性显色反应不是取决于试剂中pH改变,可以避免一些影响pH的因素所致的假阴性,福建三强生化有限公司生产的CPUT试剂盒属于这种方法,可半定量指示Hp感染的程度。
(2)呼气试验:用核素标记尿素,口服后测定呼气中标记的CO2量,能间接反映尿素酶的量,属非侵入性检查,呼气试验具有快速,可靠,安全,无痛苦的优点,适合大规模流行病学调查,表明目前是否有Hp感染,而不是曾否有过感染,因此优于血清学检查,有研究发现服用胶态次枸橼酸铋剂2h后,即可见14CO2量明显降低,因此用于疗效观察是一种较敏感的指标,也是随访的一种理想方法,呼气试验根据标记物的不同,分为13C-尿素呼气试验(breath test)和14C-尿素呼气试验。
(3)13C-尿素呼气试验:受试者口服13C-尿素5mg/kg,随后每10min收集一次呼气标本,连续3h,如果胃内有Hp感染,口服的13C-尿素溶液在尿素酶的作用下分解成13CO2,经胃肠道吸收后呼出,收集的气体标本用质谱仪分析,计算13CO2含量,有Hp感染者在口服试液后20min即出现13CO2升高,在100min内持续升高,而无Hp感染者无13CO2呼出,13C为稳定性核素,无放射性,可反复检查,但13CO2测定较为复杂,需用质谱仪,费用昂贵,多数医院尚不能开展。
(4)14C-尿素呼气试验:为了克服13C-尿素呼气试验操作复杂,费用昂贵的缺点,用14C-尿素取代13C-尿素,得到同样满意的效果,检测14C用液体闪烁计数器即可,因而更为实用,其缺点是14C有一定的放射性,不适合于孕妇及儿童。
影响呼气试验精确性因素:假阴性结果最常见原因是用抗生素,铋剂或奥美拉唑不久后做的呼气试验(一般要求在治疗结束后至少1个月再进行);其次是尿素从胃排空过快或样本收集太迟,假阳性结果为体内存在或口腔内存在有尿素酶活性的细菌。
但呼气试验仅能提供Hp存在的信息,而不能区分消化道疾病,无法代替胃镜检查,不能作为有上消化道症状儿童的最初评价方法。
(5)血清学检查:Hp的血清学诊断是非侵袭和间接的方法,主要用于流行病学或筛选,不能单纯作为Hp感染最初的诊断工具,除非和其他方法联合应用,血清学检查的基础是Hp具有诱导机体局部和全身产生免疫反应的能力,用细菌凝集,补体结合和ELISA三种方法能检测到Hp抗体,ELISA由于操作简单,诊断快速,价格便宜和敏感性高等因素,故临床应用较多。
ELISA方法有2种:
①定性试验:以阴或阳性表示,不仅用于血清,也可用于唾液,牙龈分泌物,特别适用儿童,缺点是假阳性率高,故阳性结果常需补充另一个肯定方法。
②定量试验:由机器测试,结果更精确,还可用于治疗后的随访检查。
血清学试验由于为非侵入性且简单在儿童中应用受欢迎,是一个理想的筛选试验,小儿中由于Hp感染比成人少,阳性发现较成人更有助于诊断,文献报道小儿中IgG抗体含量与细菌的多少或胃炎组织学严重程度之间有一定相关性,但血清学不能作为单一的诊断试验用,且因Hp根除后抗体下降缓慢,故也不能用于抗菌治疗后的即刻随访。
血Hp免疫印迹法:Hp-IgG抗体,cagA,vacA蛋白抗体,可用于区分感染的菌株的类型,但价格昂贵。
常规做胸片X线检查和B超检查,除外某些慢性疾病如结核,肝炎。
(温馨提示:以上资料仅供参考,具体情况请向医生详细咨询)
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