生殖器疱疹应该如何进行诊断

患者信息：

姓名：李先生

性别：男

年龄：28

患病信息：怀疑是患了生殖器疱疹但不知道是不是，请问患了此病应该如何诊断?

针对以上描述，专家为您解答如下：

一、细胞学方法

对皮损刮片做Wright-Gemsa(Tzanck试验)或Papanicolaou染色，可检出HSV感染特征的巨细胞包函体，但不能区别HSV感染或水痘-带状疱疹病毒感染，敏感性仅为病毒分离的60%。

二、培养法

从水疱底部取材做组织培养分离病毒，为目前较敏感、最特异的检查方法，需5-10天，因其技术条件要求高，价格昂贵，不能普遍使用。

三、抗体检测

目前最广泛的是HSV-2抗体检测，如蛋白印迹法也可用gD2作抗原检测HSV-2抗体，具有敏感性，且能区分HSV-1和HSV-2的优点。

四、基因诊断

(一)用PCR分型检测单纯疱疹病毒

PCR是一种敏感性高，特异性强的快速检测方法，标本中含有1fgHSV-DNA就可以检出，其在HSV感染的诊断研究中发展较快，且分型检测HSV是发展的趋势。

1、标本采集和处理

(1)标本采集

①脑脊液：直接无菌采取患者0.5ml脑脊液标本于无菌试管送检.如肉眼可见血色，应离心取上清。

②羊水及婴儿血清:同上，应避免溶血.

③脑组织:脑组织尸检、活检标本，加1mlPBS标本缓冲液研磨后，待检。

④眼及皮肤病灶分泌物：用预测(半干)棉拭子直接取患处分泌物，置1mlPBS标本缓冲液中送检。

⑤生殖器(宫颈、阴道、外阴、阴茎)标本：先用消毒棉拭子擦去病变部位表面粘液、污垢，再用预潮棉拭子用力擦拭患处分泌物，置1mlPBS标本缓冲液中送检。

(2)标本处理

①预处理：所有液体标本均可直接进行模板制备;可以取100μl标本液，离心5000r/minX5min后，去上清，取沉淀物进行模板制备。

②模板制备：

a:蛋白酶K消化裂解法：沉淀物加100μl蛋白酶K消化裂解液，55℃1h后，煮沸10min，离心5000r/minX5min，收集上清。

b:水煮法：沉淀物加100μl蒸馏水，摇均水煮20min，离心5000r/minX5min收集上清。

c:1%TritonX-100裂解法:取采集的标本液100μl，加入1μlTritonX-100，水煮20min，5000r/minX5min，收集上清。

d:5%NP-40裂解法：取采集的标本液100μl，加5μlNP-40，水煮20min，5000r/minX5min收集上清。e:如标本溶血严重经上述裂解处理后，再加等体积酚-氯仿抽提、冷乙醇沉淀DNA，加10μlDW溶解待检。

2、PCR扩增

(1)引物设计。以HSVDNA聚合酶的高保守区为检测靶序列以确保特异性。设计3个引物，一个上游共同性引物，DNAP5(5′ATGGTGAAAACATCGACATGTACGG3′)：

二个下游特异性引物，DNAP3-1(5′CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC3′)和DNAP3-2(5′CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC3′)，可以分别扩增出HSV-1469bpDNA片段(1981～2359)、HSV-2391bp片段(1561～1953)：从二型PCR扩增产物中设计了一个不分型的特异性探针HSVP35‘GGCGTAGTAGGCGGGGATGTCGCG3‘)。

(2)PCR实验体系。取模板10μl：DNAP50.5(0.2μmol/L)：DNAP3-10.5μl(0.2μmol/L)：DNAP3-20.5μl(0.2μmol/L)：4XdNTP8μl(4X200μmol/L)：10XdNTP8μl(4X200μmol/L);10X缓冲液10μl：DMSO4μl;加DW65.5μl;石蜡油30μl.。

水煮(96℃～100℃)7min

加TaqDNA聚合酶1μl;(2.5U)

72℃4min↓

95℃40s↓,

65℃60s→72℃70s↓

33个循环

70℃4min