重症肌无力患者CD5 B细胞的变化

时间 : 2015-12-28 15:12:10 来源：放心医苑网

[摘要]

肌无力患者cd5+b细胞的变化中国免疫学杂志2000年第3期第16卷临床免疫学作者：韩钊　徐文桢　刘鸣　魏于全　雷松单位：韩钊（温州医学院附一院神经科，温州325000）；徐文桢（华西医大附一院神经科，成都610041）；刘鸣（华西医大附一

重症肌无力患者cd5+b细胞的变化

中国免疫学杂志2000年第3期第16卷临床免疫学

作者：韩钊徐文桢刘鸣魏于全雷松

单位：韩钊（温州医学院附一院神经科，温州325000）；徐文桢（华西医大附一院神经科，成都610041）；刘鸣（华西医大附一院神经科，成都610041）；魏于全（华西医大肿瘤生物治疗中心，成都610041）；雷松（华西医大肿瘤生物治疗中心，成都610041）

关键词：重症肌无力；乙酰胆碱受体抗体；cd5+b细胞；流式细胞仪

摘要目的：研究cd5+b细胞在重症肌无力（mg）发病中的作用。方法：采用免疫荧光双标记技术和流式细胞仪对39例mg患者和18例健康对照者周围血中cd5+细胞（cd5+cd19+）的百分率进行测定，同时用elisa间接法检测mg患者血清中achrab。结果：在mg患者周围血cd5+b细胞百分率显著高于对照组，而且在血清achrab阳性和阴性mg中cd5+b细胞均明显高于对照组；但在血清achrab阳性和阴性mg患者之间cd5+b细胞百分率无显著性差异。结论：cd5+b细胞与mg发病有关，但与achrab的产生之间无显著相关；可能在血清achrab阴性mg的发病中起作用。

中国图书分类号r746.1r392.11

changeofcd5+bcellinpatientswithmyastheniagravis

hanzhao

（departmentofneurology,thefirsthospital,wenzhoumedicalcollege,wenzhou325000）

xuwen-zhen

（departmentofneurology,thefirsthospital,westofchinamedicaluniversity,chengdu610041）

liuming

.）（departmentofneurology,thefirsthospital,westofchinamedicaluniversity,chengdu610041）

abstract；objective:tostudytheroleofcd5+bcellsinthepathogenicmechanismofmyastheniagravis(mg).methods:thepercentagesofcd5+bcell(cd5+cd19+)in39patientswithmgand18healthycontrolweredeterminedusingimmunofluorescencedouble-stainingandflowcytometry;theachrabofseruminmgpatientsweredeterminedbyindirectelisamethods.results:thepercentagesofcd5+bcellwassignificantincreaseinmgpatientsascomparedwithhealthycontrols,moreover,thepercentagesofcd5+bcellinserumachrabpositiveandserumachrabnegativemgpatientswerebothhigherthanthatofhealthycontrols,butthepercentagesofcd5+bcellhavenosignificantdifferbetweenserumachrabpositiveandserumachrabnegativemgpatients.conclusion:cd5+bcellmayplayapathogenicroleinthedevelopmentofmg,thereisnosignificantcorrelationbetweenachrabproductionandcd5+blymphocytes;cd5+bcellmightcontributetothepathogenesisofachrabnegativemg.

keywords：myastheniagravisacetylcholinereceptorantibodycd5+bcellflowcytometry

cd5抗原是t细胞上的一种表面标志，然而1980年wang等发现人的b细胞性慢性淋巴细胞性白血病细胞表面有cd5抗原存在，后来研究发现这种cd5+b细胞具有分泌多种自身抗体的功能，与自身免疫病的发病关系密切［1］。重症肌无力（myastheniagravis，mg）是一种自身免疫疾病，抗乙酰胆碱受体抗体（acetylcholinereceptorantibody,achrab）是其主要致病自身抗体，近年来有人发现重症肌无力患者体内cd5+b细胞增多［2］。为了探讨cd5+b细胞在mg发病及achrab产生中作用，我们用流式细胞仪分别对achrab阳性和achrab阴性重症肌无力患者周围血中cd5+b细胞百分率进行了测定。

1材料与方法

1.1研究对象

1.1.1mg组39例mg患者根据典型的临床表现、新斯的明试验、肌电图和血清achrab检查确诊，并排除合并其他免疫性疾病者，抽血前2个月内未应用免疫抑制剂。男15例，女24例；年龄5～70岁，平均32.8±13.53岁；病程1月～10年；眼肌型11例，全身型28例；血清achrab阳性29例，achrab阴性10例。

1.1.2对照组健康志愿者18例，年龄16～64岁，平均35.3±12.34岁。

1.2试剂淋巴细胞分离液（上海华精）、rpmi1640培养液含5%胎牛血清（美国sigma）、achr抗原由华西医大微生物研究室按monnier法提取、异硫氰酸荧光素（fitc）/藻红蛋白（pe）标记的配对小鼠抗人单克隆抗体：fitc-cd19/pe-cd5、fitc-igg1/pe-igg1（法国国际immunotech公司）。

1.3方法

1.3.1标本采集所有研究对象于早上8：00～9：00采集静脉血4ml分装2管。第1管，2mledta抗凝，3h内进行细胞表型分析；第2管，2ml不抗凝，分离血清，待测achrab。

1.3.2淋巴细胞准备无菌条件下取抗凝血采用ficoll密度梯度法分离外周血单个核细胞（pbmc），用rpmi1640培养液将其调制成1×106ml-1的细胞悬液。

1.3.3免疫荧光染色取调制好的淋巴细胞悬液20μl，分别加入配对荧光抗体：fitc-抗cd19/pe-抗cd5、fitc-igg1/pe-igg1（此为空白对照），室温下反应15min，加入3mlpbs液(0.01mol/l,ph7.4)摇匀，1500r/min离心3min，去上清液洗去游离的单抗，加入0.9mlpbs液，上流式细胞仪。

1.3.4细胞表型分析在华西医大附一院肿瘤生物治疗中心采用coulteresp型流式细胞仪。每个样品均分析104个细胞，分别检测出cd5+（全t细胞）、cd19+（全b细胞）、cd5+cd19+（cd5+b细胞）、cd5-cd19+（传统b细胞）的百分率。

1.3.5achrab的测定采用华西医大微生物研究室建立的elisa间接法测定，方法见参考文献［3］。

1.3.6统计分析所得数据全部输入微机，建立数据库，采用spss软件，进行t检验。

2结果

2.1mg患者与对照组相比较、全t细胞（cd5+）、全b细胞（cd19+）、传统b细胞（cd5-cd19+）的百分率在两组间无显著差别，而cd5+b细胞（cd5+cd19+）的百分率在mg组高于对照组，有显著差别，p＜0.05（见表1，图1）。

图1mg组和对照组cd5＋b细胞(cd5+cd19+)的百分率

fig.1percentageofcd5＋bcells(cd5+cd19+)intheperipheralbloodofpatientswithmgandhealthycontrol(hc)

表1mg患者和健康对照组周围血中cd5+、cd19+、cd5-cd19+、cd5+cd19+细胞百分率的比较（±s,%）

tab.1comparisonofthepercentagesofcd5+，cd19+，cd5-cd19+，cd5+cd19+cellsinpatientswithmyastheniagravisandhealthycontrols（±s,%）

groupscd5+cd19+cd5-cd19+cd5+cd19+myastheniagravis73.72±10.9214.05±5.899.73±4.574.05±2.70(n=39)healthycontrols68.53±10.1216.45±4.4613.34±5.981.59±0.62(n=18)p＞0.05＞0.05＞0.05＜0.052.2血清achrab阳性和achrab阴性mg患者周围血中cd5+b细胞（cd5+cd19+）的百分率均高于对照组，两者有显著差别，p均＜0.05，但achrab阳性和achrab阴性mg组相比较，无统计学差别；全t细胞（cd5+）、全b细胞（cd19+）、传统b细胞（cd5-cd19+）的百分率在两组间无显著差别（见表2）。表2血清achrab阳性mg患者和achrab阴性mg患者cd5+、cd19+、cd5-cd19+、cd5+cd19+细胞百分率的比较（±s,%）

tab.2comparisonofthepercentagesofcd5+，cd19+，cd5-cd19+，cd5+cd19+cellsinserumachrabpositiveandserumachrabnegativemgpatients（±s,%）

achrab

positive(n=29)achrab

negative(n=10)healthy

controls(n=18)cd5+70.73±10.8772.33±10.9768.53±10.12cd19+16.01±6.5413.89±5.7616.45±4.46cd5-cd19+11.24±5.3410.56±4.8713.12±5.86cd5+cd19+4.12±2.871)3.83±1.762)1.59±0.62note:1)p＜0.05；2)p＜0.05comparedwithhealthycontrols3讨论

重症肌无力是一种自身免疫性疾病，尽管其体内存在大量的自身抗体，但直接分泌抗体的b细胞（cd19+）却未见明显增加，本研究及国内外众多学者的报道都证实了这一点。但是，表达cd5分子的cd5+b细胞（cd5+cd19+）在mg患者周围血中表现出有意义的增高，本研究的结果发现与raghed和lisak的报道一致［2］。这说明cd5+b细胞与mg的发病可能有关。同时，我们还发现achrab阳性和achrab阴性mg患者周围血中cd5+b细胞均明显高于对照组，这一结果表明，cd5+b细胞不仅可能参与了achrab阳性mg的发病，而且可能与achrab阴性的mg发病有关。

体外培养表明，cd5+b细胞产生抗体是以igm为主的低亲和性的自身抗体［1］。在mg患者血清中的achrab是以igg为主的具有高亲和力抗体。cd5+b细胞在某些条件下产生抗体的类型可从igm型向igg型转换［4］，这样，achrab阳性mg患者中增高数量的cd5+b细胞分泌achrab是有可能的。但是，achrab阳性组和achrab阴性组cd5+b细胞无差异，表明achrab的产生与cd5+b细胞无明显相关，araga等的研究表明achrab主要还是由cd5-b细胞产生，而不是由cd5+b细胞产生［5］。因此，在achrab阳性mg患者中cd5+b细胞增高与mg发病的确切机制还不清楚。cd5+b细胞在mg患者体内增加可能与重症肌无力发病的遗传背景有关。braun等认为cd5+b细胞可分泌抗独特型抗体而通过抗独特型网络起免疫调节作用［6］，因而，cd5+b细胞在mg的自身免疫反应形成中还可能通过免疫调节机制而起作用。

约有10%～15%的mg患者血清中检测不到achrab，这部分血清抗体阴性的mg是当前mg研究中的热点。国内外大量资料表明，这类mg仍可能是自身免疫病，致病因子可能是血浆中非igg部分的某种或多种因子。yamamoto等在血清抗体阴性的mg患者的血浆中发现了一种igm因子，可以影响achr通道中na+内流，但不影响钠通道中na+的内流，同时这种igm因子也可出现在部分血清抗体阳性的mg患者的非igg部分，认为这种igm因子可能是导致血清achrab阴性mg发病和疾病严重程度与achrab浓度不相关的原因［7］。

在我们的研究结果中，achrab阴性mg组cd5+b细胞增多，而cd5+b细胞产生的自身抗体又以igm为主，因此，我们推测，mg患者体内数量增多的cd5+b细胞会产生较多igm抗体，通过干扰achr通道中na+内流而导致抗体阴性mg的发病。但yamamoto所发现的这种igm因子是否是由cd5+b细胞分泌的自身抗体还需实验证实。

综上，cd5+b细胞可能与mg发病有关，但与achrab的产生之间无显著相关；可能在achrab阴性mg发病中起作用。随着cd5+b细胞功能特性研究的深入，cd5+b细胞在mg发病中的作用机制将会阐明。

作者简介：韩钊，男，31岁，硕士，主治医师，主要研究神经免疫学；

参考文献：

［1］邱晓彦.b-1细胞研究进展.国外医学·免疫学分册,1996；19(5)：235

［2］raghebs,lisakrp.phenotypicandfunctionalabnormalitiesofbcellinmyasteniagravis.annnyacadsci,1993;681:256

［3］陈平，徐文桢，龚其美etal.重症肌无力患者血清sil-2和achrab水平变化的研究.上海免疫学杂志,1995;15(3):138

［4］hayakawak,hardyrr.normal,autoimmune,andmalignantcd5+bcells:thely-1blineage?annurevimmunol,1988；6:197

［5］aragas,kishmotom,adachiaetal.thecd5+bcellsandmyastheniagravis.autoimmunity,1995；20(2):129

［6］braunj,citriy,baltimoredetal.b-ly1cells:immortally-1+blymphocytecelllinesspontaneouslyarisinginmurinespleniccultures.immunolrev,1986；93:5

［7］yomamotot,vicenta,ciullataetal.seronegativemyastheniagravis:aplasmafactorinhibitingagonist-inducedacetylcholinereceptorfunctioncopurifieswithigm.annneurol,1991；30(4):550

收稿日期：1999-02-04

修改日期：1999-05-20

（责任编辑：jbwq）