再生障碍性贫血患者骨髓Fas抗原和凋亡率测定及意义

时间 : 2015-12-11 18:38:01 来源：放心医苑网

[摘要]

障碍性贫血患者骨髓fas抗原和凋亡率测定及意义临床血液学杂志1999年第4期第12卷论著作者：刘希民　孙晓明单位：济南军区总医院血液科　邮政编码：济南，250031关键词：贫血，再生障碍性；fas抗原；细胞凋亡　　摘要　目的：探讨fas抗原

再生障碍性贫血患者骨髓fas抗原和凋亡率测定及意义

临床血液学杂志1999年第4期第12卷论著

作者：刘希民孙晓明

单位：济南军区总医院血液科邮政编码：济南，250031

关键词：贫血，再生障碍性；fas抗原；细胞凋亡

摘要目的：探讨fas抗原和凋亡率与再生障碍性贫血(再障)发病机制的关系。方法：应用流式细胞仪测定26例再障患者骨髓单个核细胞(mnc)fas表达率及凋亡率，其中急性再障11例，慢性再障15例，10例正常人作对照。结果：再障患者fas表达率及凋亡率均高于对照(p＜0.05)；急性再障fas表达率及凋亡率高于慢性再障，但差异无显著性(p＞0.05)。结论：再障骨髓mnc的fas表达率和凋亡率增高，推测与再障发病机制有关。

determinationandsignificanceoffasantigenandapoptoticratesinaplasticanemia

liuximin,sunxiaoming

departmentofhematology,jinancommandhospital,jinan,250031

abstractobjective:toexploretherelationshipbetweenfasantigenandapoptoticratesandpathologicalmechanismofaplasticanemia.method:determiningfasantigenexpressingratesandapoptoticratesofmarrowmononuclearcells(mnc)byflowcytometryin26patientswithaplasticanemia(aa),includingacuteaa(aaa)11casesandchronicaa(caa)15cases,10healthysubjectsactedascontrols.result:fasantigenexpressingratesandapoptoticratesofaawerehigherthanthoseofcontrols.p＜0.05;fasantigenexpressingratesandapoptoticratesofaaawerehigherthanthoseofcaa,buttherewasnosignificantdifference,p＞0.05.conclusion:fasantigenexpressingrateandapoptoticratesincreasedinmarrowmncsofaa,whichpresumedlyrelatedtopathologicalmechanismofaa.

keywordsaplasticanemiafasantigenapoptosis

再障发病机制与造血干细胞损伤、骨髓微环境缺陷及抑制性淋巴细胞和体液抑制因子存在有关，近年来发现再障fas表达增加，造血细胞凋亡增高，且与再障病情相关。本文测定再障患者骨髓fas表达率及调亡水平。

1材料与方法

1.1病例收集本院门诊及住院初发再障患者26例，男17例，女9例，年龄14～45岁，中位年龄27岁。设10例献血员做对照，年龄及性别与患者相似。再障诊断符合1987年第四届全国再障学术会议修订标准，其中急性再障11例，慢性再障15例。

1.2试剂抗fas单抗为法国国际免疫公司产品，碘化丙锭为sigma公司产品，流式细胞仪facscan型，美国bd公司产品。

1.3方法取骨髓4～5ml，肝素抗凝，用ficoll-hypaque分离骨髓单个核细胞，pbs缓冲液漂洗，将细胞悬液调至1×109/ml，取细胞悬液0.5ml，加入抗fas单抗，室温下反应20min，pbs缓冲液冲洗2次，除去未结合的荧光抗体；另取0.5ml，碘化丙锭染色，用流式细胞仪检测凋亡细胞。流式细胞仪检测：上机前先以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%，上机后收集2万个细胞，荧光强度对数放大，光散数据存软盘，测试完后应用cellqutstplot软件分析数据。

1.4统计方法t检验。

2结果

①对照组fas阳性率为15.33±6.34%，急性再障fas阳性率33.79±9.88%，慢性再障fas阳性率27.65±7.43%，急性与慢性再障fas阳性率较对照组明显增高，t值分别为2.34和2.13，p＜0.05；急性与慢性再障之间fas阳性率差异无显著性，t=0.82，p＞0.05。②对照组凋亡率为0.62±0.04%，急性再障凋亡率3.68±1.13%，慢性再障凋亡率2.79±0.96%，急性与慢性再障凋亡率较对照组明显增高，经t检验p＜0.05，t值分别为2.46和2.23，而急性与慢性再障之间凋亡率差异无显著性，t=0.94，p＞0.05。

3讨论

fas及其配体fasl是介导细胞凋亡的膜蛋白分子，fas为跨膜蛋白，其胞内区有约70个氨基酸组成的结构域，为传导凋亡信号所必需。当细胞表面的fasl及抗fas抗体与细胞表面fas结合后，致该fas阳性细胞凋亡。fas广泛表达于造血组织细胞。maciejewski等〔1〕发现再障患者骨髓cd34阳性细胞上fas表达明显高于正常对照，患者fas表达增高与tnf和ifn诱导有关，而且对tc细胞的杀伤敏感性增高，正常骨髓cd34阳性细胞对fas介导的凋亡不敏感，故而推测fas/fasl与再障骨髓衰竭的病理机制有关〔1，2〕。众所周知，tnf和ifn为造血抑制因子，再障患者体内这两种因子水平增高，故推测tnf和ifn通过调控fas/fasl，诱导骨髓造血细胞凋亡，来实现对骨髓造血的抑制。philptt等〔3〕利用7-氨基放线菌素d(7aad)对凋亡细胞染色，应用流式细胞仪测定凋亡细胞，发现骨髓单个核细胞凋亡率在患者和正常人间差异无显著性，而再障骨髓cd34阳性细胞凋亡明显升高，且cd34阳性细胞数量越少，则其凋亡率越高，病情越严重。他们认为，再障造血细胞凋亡增加，导致造血细胞减少。本文应用碘化丙锭对凋亡细胞染色，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果表明，再障患者骨髓单个核细胞fas表达及凋亡增加，但凋亡率与病情严重性之间无明确关系。philptt〔3〕所用标记凋亡细胞的染料与本文不同，造成测定凋亡细胞的敏感度存在差别，这可能是结果不同的原因。再障骨髓单个核细胞凋亡增高的机理考虑与fas表达增高有直接关系。研究表明t细胞(主要是tc)既表达fas，又表达fasl，t细胞上fasl与骨髓造血细胞上fas结合，引起骨髓细胞凋亡〔4〕。也可能与骨髓内刺激造血细胞生长因子如gmcsf等不足，抑制凋亡因素减弱有关。因骨髓mnc内既包含cd34阳性的造血细胞，也含有长寿命的淋巴细胞，故与直接测定cd34阳性细胞凋亡率不完全相符，与再障病情轻重无一致性。

参考文献

1maciejewskijp,selleric,satot,etal.increasedexpressionoffasantigenonbonemarrowcd+34cellsofpatientswithaplasticanaemia.brjhaematol,1995,91:245～248

2maciejewskijp,selleric,andersons,etal.fasantigenexpressiononcd34humanmarrowcellsisinducedbyinterferonγandtumornecrosisfactorαandpotentiatescytokine-mediatedhematopoieticsuppressioninvitro.blood,1995,85:3183～3186

3phipottnj,scopesj,marshjcw,etal.increasedapoptosisinaplasticanemiaboneprogenitorcells.exphematol,1995,23:1642～1649

4贾克明.加强fas和fas配体的研究.中华内科杂志.1997，36：651～653

(1998-09-29收稿)

（责任编辑：jbwq）