医学论文,阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子水平与免疫防卫能力的研究

阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子水平与免疫防卫能力的研究

免疫学杂志2000年第5期第16卷基础免疫学

作者：魏泉德　朱家勇

单位：魏泉德（广东医学院寄生虫学教研室，广东湛江524023）；朱家勇（广东医学院寄生虫学教研室，广东湛江524023）

关键词：细胞因子；阿米巴肝脓肿；细胞免疫；弓形虫

　　［摘要］目的了解阿米巴肝脓肿患者机体的免疫防卫能力。方法ELISA、比色法及流式细胞仪等检测了40例阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、sIL-2R、弓形虫感染率、NO、血液CD4／CD8T细胞、红细胞C3b受体花环率（RBC-C3bRR）及免疫复合物花环率（RBC-ICR）。结果TNFα、IL-6、IL-8、sIL-2R、NO、RBC-ICR显著高于正常对照组；RBC-C3bRR低于正常对照组；CD4增高，CD8降低，CD4／CD8比值下降；弓形虫感染率与正常组无差异。结论阿米巴肝脓肿患者非特异性细胞免疫受抑制、特异性细胞免疫增强，免疫防卫能力正常。

　　［中图分类号］R382.1［文献标识码］A

　　［文章编号］1000-8861（2000）05-0349-03

Studyonlevelofcytokinesinseraandimmunedefenseabilityofpatientswithamoebicliverabscess

WEIQuan-de，ZHUJia-yong

　　（DepartmentofParasitology，GuangdongMedicalCollege，Zhanjiang524023，China）

　　［Abstract］ObjectiveToinvestigatetheimmunedefenseabilityofpatientswithamoebicliverabscess．MethodsELISA、colorimetryandflowcytometrywereusedtodetectTNF-α，IL-6，IL-8，sIL-2R，toxoplasmainfectionrate（ToR），NOandCD4／CD8T-cellin40patientswithamoebicliverabscess．Theredcellfunctionwasmeasuredatthemeantimebydetec-tingRBC-C3bRRandRBC-ICRinmembraneofredcell．ResultsThelevelofTNF-α，IL-6，IL-8，sIL-2R，NOandRBC-ICRinpatientswashigherthanthosefoundinthecontrolgroup．RBC-C3bRRwaslowerthanthatinthecontrolgroup．ThenumberofCD4T-cellingroupofpatientsdecreased，whilethatofCD8T-cellincreased．NosignificantdifferenceexistedbetweenToRfoundinpatientsandcontrolgroup．ConclusionThenon-specificcell-mediatedimmunitywassuppressedinpatientswithamoebicliverabscesswhilespecificcell-mediatedimmunityenhanced．Theimmunedefenseabilityofthepatientswasnormal．

　　［Keywords］cytokine；amoebicliverabscess；cell-mediatedimmunity；toxoplasma

　　阿米巴肝脓肿是由溶组织内阿米巴感染所引起的一种临床常见病，溶组织内阿米巴可分泌毒素、酶、吞噬宿主免疫细胞，从而抑制宿主免疫应答。主要免疫学特征为B淋巴细胞多克隆激活，细胞免疫功能受抑制，但阿米巴主要抑制机体非特异性细胞免疫功能，机体特异性细胞免疫功能反而得到增强［1］。为了解阿米巴肝脓肿患者机体的细胞因子水平和综合免疫能力，我们检测了40例阿米巴肝脓肿患者血清中TNFα、IL-6、IL-8、sIL-2R、NO水平，RBC免疫功能及CD4／CD8比例，弓形虫感染率并探讨其意义。

　　1　材料和方法

　　1.1　样本采集　40例阿米巴肝脓肿患者，均为我附属医院传染科病人，年龄20～59岁。治疗前采血，收集血清；部分血抗凝，于24h内测CD4／CD8及红细胞免疫功能。正常对照组40例，采自我院健康体检者。

　　1.2　血清TNFα、IL-6、IL-8和sIL-2R测定　双抗夹心ELISA：sIL-2R试剂盒由白求恩医科大学免疫教研室提供；TNFα酶联免疫检测试剂盒由军事医学科学院提供；IL-6和IL-8酶联免疫检测试剂盒由第四军医大学免疫学教研室提供，按说明书操作。TNFα、sIL-2R于492nm测OD值；IL-6和IL-8以波长410nm测OD值（酶标仪为华东电子管厂DG3022型）。以标准品绘制标准曲线查出待检样品的含量。

　　1.3　RBC免疫功能测定　致敏／未致敏酵母菌由第二军医大学长海医院免疫室提供。RBC的C3b受体花环率（RBC-C3bRR）及RBC免疫复合物花环率（RBC-ICR）的测定参照文献［2］。

　　1.4　外周血CD4／CD8测定　采用美国Coulter公司EPICS-XL型流式细胞仪测定，CD4／CD8双标单抗及样品处理液均为Coulter公司产品，正常值CD4约为53％，CD8约为25％，按说明书操作。

　　1.5　血清中一氧化氮（NO）测定　比色法试剂盒由军事医学科学院提供，按说明书操作。用VIS-723型分光光度计（上海第三分析仪器厂产品），545nm比色，读OD值。用亚硝酸钠为标准品，绘制标准曲线，根据样品OD值，按标准曲线计算NO含量。

　　1.6　血清中弓形虫抗体IgG测定　直接ELISA试剂盒由卫生部兰州生物制品研究所提供。血清1∶50稀释，100μl／well加入已包被弓形虫抗原的酶标软板，每份血清加2孔，37°C15min；加酶标抗体（工作液）37°C15min；底物显色。ELISA检测仪（华东电子管厂产品，DG3022）于410nm测OD值并打印结果。

　　1.7　统计分析　样本均值的比较用t检验；率的比较用χ2检验；相关系数用tr检验。

　　2　结果

　　2.1　血清细胞因子水平　阿米巴肝脓肿患者血清TNFα、IL-6、IL-8和sIL-2R水平均极显著地高于正常对照组（P＜0.01），见表1。

　　2.2　NO测定结果　阿米巴肝脓肿患者血清NO含量平均为59．43±2．91μmol／L，显著高于正常对照组（50.04±6．23μmol／L），P＜0.05，见表1。

　　2.3　红细胞免疫功能　阿米巴肝脓肿患者的RBC-C3bRR明显低于对照组；而RBC-ICR则明显高于对照组（P＜0.01）。血清sIL-2R水平与RBC-C3bRR负相关（r＝－0.95，P＜0.05）；与RBC-ICR正相关（r＝0.98，P＜0.05），见表2。

　　2.4　T细胞亚群测定结果　阿米巴肝脓肿患者外周血的CD4均值为25.76％±5．72％，明显低于标准对照值（53％）；而CD8均值为34．92％±6．29％，明显高于标准对照值（25％）；CD4／CD8比值（0.74±0.30）低于标准对照值（2.12，P＜0.01），见表2。

　　2.5　弓形虫感染率　阿米巴肝脓肿患者血清弓形虫阳性率为12．5％，与正常组阳性率（10％）无差异，见表2。

表1　　40例阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子及一氧化氮水平（

　　Tab1　Levelofcytokinesandnitricoxidein40patientswithamoebicliverabscess（

表2　　40例阿米巴肝脓肿患者RBC免疫功能、T细胞亚群、弓形虫感染率（ToR）

　　Tab　2　Red-cell　immune　function，CD4／CD8

　　T-cell　and　infection　rate　of　toxoplasma（ToR）in　patients　with

　　**P＜0.013　讨论

　　IL-2R是一种重要的免疫抑制剂，在阿米巴肝脓肿患者主要由阿米巴感染后激活B细胞而表达，除表达于细胞膜之外，亦可呈游离状态即可溶性IL-2R（sIL-2R），本研究表明：阿米巴肝脓肿患者血清sIL-2R异常增高，因其可竞争结合IL-2而导致机体细胞免疫功能受到抑制［1］。

　　已证实红细胞免疫功能主要有：增强吞噬细胞吞噬功能；识别和递呈抗原；清除循环免疫复合物；效应细胞等作用，属非特异性细胞免疫范畴。红细胞免疫的生理学基础是细胞免疫粘附作用。评价红细胞免疫功能是以红细胞免疫粘附受体的活性为指标，酶母菌花环试验是最常用的检测方法。本文结果表明：阿米巴肝脓肿患者有继发性RBC免疫功能低下，表现为红细胞表面C3bRR显著降低、ICR显著增高，因粘附过多IC，使RBC-C3bRR空位减少，活性降低，RBC免疫功能受抑制。血清sIL-2R水平与RBC-C3bRR负相关；与RBC-ICR正相关。说明阿米巴肝脓肿患者细胞免疫功能受抑制主要是非特异性细胞免疫降低。

　　阿米巴引起T细胞的免疫反应较复杂。CAMPBELL等［3］用沙鼠作动物模型，发现阿米巴引起的T细胞应答涉及Th0、Th1及Th2型T细胞（Th1细胞主要分泌IL-2、TNF-α、IFN-；而Th2则产生IL-4、IL-6、IL-9、IL-10）。感染早期（5～10d）这些细胞因子处于较低水平，感染后期（60d）则达高峰。体外实验已证实阿米巴可引起IL-8增高［4］。本研究表明阿米巴肝脓肿患者血清TNFα、IL-6和IL-8均增高，表明阿米巴肝脓肿患者有特异性细胞免疫功能增强。本实验中的病例病程均在2～4周，且未经抗阿米巴治疗，由于临床上病程的确切时间较难确定，故可能与动物实验结果不一致。一氧化氮（NO）是宿主抗溶组织内阿米巴感染的重要防御性介质，由NO介导的杀灭效应在阿米巴肝脓肿病程中发挥着重要作用。已证实细胞因子特别是TNF-α可刺激巨噬细胞及其它免疫效应细胞产生ΝΟ［5，6］，可杀灭组织内62％～73％的阿米巴［7］。阿米巴肝脓肿患者NO水平高于正常，也说明宿主特异性细胞免疫功能得到增强。

　　CD4主要分布于Ti／Th细胞，CD8则分布于Ts／Tc细胞。CD4下降、CD8增高，CD4／CD8下降，说明机体细胞免疫功能受抑制。但在阿米巴肝脓肿患者，因其主要为非特异性细胞免疫受抑制，特异性细胞免疫增强，所以免疫防卫能力正常。而CAMPBELL等［3］证实阿米巴感染早期虽然抑制T细胞、巨噬细胞活性，但感染动物可抵抗再感染。推测阿米巴肝脓肿患者外周血CD4下降主要为Th（活化的Th表达IL-2R），CD8增高主要为Tc。

　　弓形虫是一种机会致病性球虫，在机体免疫功能下降时，感染率随之上升。因此可用弓形虫感染率来判断机体免疫功能是否正常。本实验表明：阿米巴肝脓肿病人弓形虫感染率与正常无差异，说明阿米巴肝脓肿病人机体免疫防卫能力正常。

　　综上所述，阿米巴肝脓肿病人免疫功能受抑制主要为非特异性细胞免疫，特异性细胞免疫增强，其免疫防卫能力正常。

　　［作者简介］魏泉德（1963－），男，湖北当阳市人，讲师，硕士，主要从事寄生虫免疫及分子疫苗的研究。

［参考文献］

　　［1］赵慰先．人体寄生虫学［M］．第2版．北京：人民卫生出版社，1994．15－183．

　　［2］郭峰．红细胞免疫研究发展趋势［J］．上海免疫学杂志，1995，15（4）：253－255．

　　［3］CAMPBELLD，CHADEEK．Interleukin（IL-2，IL-4）andtumornecrosisfactor-αresponsesduringEntamoebahistolyticaliverabscessdevelopmentingerbils［J］．JInfectDis，1997，175（5）：1176－1183．

　　［4］KIMJM，JUNGHC，IMKI，etal．SynergybetweenEntamoebahistolyticaandEscherichiacoliintheinductionofcytokinegeneexpressioninhumancolonepithelialcells［J］．ParasitolRes，1998，84（6）：509－512，