论文：散发性阿尔茨海默病患者BDNF基因G196A和C270T单体型及双体型分析,论文

作者：钱云，张志B，张晓斌，袁勇贵，宇辉，施咏梅，柏峰，谢春明

【摘要】目的：探讨脑源性神经营养因子（BDNF）基因G196A和C270T单核苷酸多态性（SNPs）在散发性阿尔茨海默病（sAD）发病机制中的作用。方法：采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术，对105例sAD患者和105例健康对照者BDNF基因、载脂蛋白E（ApoE）基因多态性进行分析。结果：（1）sAD患者C270T但非G196A基因型及等位基因频率与对照组相比差异有统计学意义（P=0.034，P=0.011）。（2）BDNFG196A和C270T单体型分析发现，4种单体型在sAD组和对照组间差异有统计学意义（P=0.048）。对照组H4单体型频率显著高于sAD组，差异有统计学意义（P=0.024）；按ApoEε4分层后，在非ApoEε4携带者中，该差异仍有统计学意义（P=0.023）。对照组基于H4的双体型频率显著高于sAD组，差异有统计学意义（P=0.029）；按ApoEε4分层后，在非ApoEε4携带者中，该差异仍有统计学意义（P=0.040）。结论：BDNFC270T位点的SNP可能与sAD的易感性相关，H4单体型及其构成的双体型是sAD的遗传保护因素，对非ApoEε4携带者而言尤其如此。

【关键词】阿尔茨海默病；脑源性神经营养因子；载脂蛋白E；单体型；双体型

阿尔茨海默病（Alzheimerdisease，AD）病因目前仍未明确，遗传因素是其发病的重要危险因素［1］。研究表明，载脂蛋白E（apolipoproteinE，ApoE）ε4等位基因是散发性AD（sporadicAD，sAD）的危险因素［2］，但并非ε4等位基因携带者均发展为AD，提示可能存在其他遗传危险因素。

尸检发现，AD患者海马脑源性神经营养因子（brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF）mRNA下降［3］。胎鼠细胞模型研究发现，BDNF基因G196A单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）可影响该基因的蛋白表达（缬氨酸替代蛋氨酸）［4］；有研究发现BDNF基因G196A、C270T与AD发病有关［5-6］，但目前仍存在争议。本研究对sAD患者BDNF基因G196A和C270T多态性及其与ApoE的相互作用进行分析。

1对象与方法

sAD组患者105例，来自东南大学附属中大医院、南京医科大学附属脑科医院和江苏省扬州五台山医院，男48例，女57例，平均年龄（72.89±6.17）岁。痴呆的诊断标准采用美国精神病学会的精神障碍诊断和统计手册第4修订版（DSM-Ⅳ）标准。首先应用简易智能状态量表（MMSE）、日常生活活动能力量表（ADL）、画钟试验、临床痴呆量表（CDR）初筛有痴呆，然后根据文化程度对可疑痴呆患者进行详细的神经心理学检查，Hachinski缺血指数分＜4分，Hamilton抑郁量表排除抑郁症，全部进行头部影像学检查（CT或MRI），符合美国神经病学、语言障碍及卒中-AD和相关疾病学会（NINCDS-ADRDA）很可能AD诊断标准，无阳性家族史。正常对照组105例，男47例，女58例，平均年龄（72.77±5.79）岁，无痴呆家族史，均为健康体检者。受试者均为汉族人，彼此无血缘关系，本人或其监护人知情同意，并获得东南大学附属中大医院伦理委员会的批准。

1.2.1模板DNA提取取-80℃冰箱保存抗凝全血，采用KI法提取白细胞基因组DNA［7］，溶于TE缓冲液，-20℃保存。