地塞米松诱导小鼠腭裂动物模型的建立

时间 : 2009-12-06 23:02:05 来源：www.studa.net

[摘要]

地塞米松诱导小鼠腭裂动物模型的建立,医学论文,医药学论文

图1体视镜（4×）观察可见胎鼠腭部正中裂隙2．2不同时间胎鼠腭裂的形态学观察

HE染色切片光镜下观察可见：GD12.5的胎鼠：模型组、对照组二者腭的发育程度无明显差别，即均为舌体位置较高，几乎与鼻中隔相连，腭突沿舌体两侧垂直向下生长（图2，3）。GD13.5：对照组的胎鼠其舌体开始下降，腭突开始上抬；模型组可见由于一侧或两侧舌体下降延迟导致一侧或两侧腭突上抬延迟以至影响了后期腭突的生长及其上皮的融合，导致了后期腭裂的形成（图4，5）。GD14.5：对照组的胎鼠其舌体降至口底，腭突完全上抬至舌体上方并呈水平方向相对生长，部分腭突相互接触，中间嵴上皮在中线区形成上皮中缝；模型组腭突位于舌体两侧并开始上抬（图6，7）。GD15.5：对照组腭突接触融合，上皮中缝消失，间充质细胞相互连接形成完整的腭器官；模型组腭突在舌体上方呈水平生长，但体积较小，不能在中线区相互接触，腭裂形成，或即使接触亦不能融合，最终形成腭裂（图8，9）。GD16.5：对照组两侧腭突与鼻中隔相接触上皮融合并发生凋亡（细胞程序化死亡，PCD），中胚层间充质组织相互穿过，腭器官分化发育，至此腭器官的发育基本完成，模型组腭突瘦小，不能与鼻中隔完全接触，腭裂形成。其形态学观察如图（图10，11）。腭裂有完全性腭裂、不完全性腭裂（单侧腭裂）两种（图12，13）。

2．3数据处理

经统计学处理，对照组小鼠取出的胎鼠极少发现腭裂形成，模型组产生了腭裂。地塞米松诱导小鼠腭裂，其畸形率为59.48%。统计数据如表1所示。表1对照组和模型组胚胎畸形率比较

复制实验性腭裂动物模型的方法比较多，按诱导方法的不同，主要分为两类：一类是外科手术诱导的动物模型，多用于腭裂临床治疗方法的探索；另一类是先天性腭裂动物模型，主要用于腭裂病因学和发生机制方面的研究[1]。目前多用地塞米松、全反式维甲酸等药物制备腭裂动物模型，而地塞米松被认为是近20年致畸研究中的一种具有较强致畸性的糖皮质激素制剂。地塞米松为一种糖皮质激素，具有抗炎症作用及孕期致胚胎畸形的副作用。傅豫川等按不同给药时间、不同给药剂量，以醋酸地塞米松为致畸药物，诱发远交系NIH小白鼠胚胎腭裂，成功建立了腭裂动物模型。其结果显示：1.妊娠第12d为最佳致畸时间，2.50mg/Kg醋酸地塞米松为最佳致畸量[2]。因此，我们选取50mg/Kg的地塞米松妊娠第11.5d腹腔内注射，对小鼠进行实验。从实验结果看，妊娠第11.5d腹腔注射50mg/Kg的地塞米松对小鼠有较高的致畸率。

Abbott等[3]认为糖皮质激素可通过改变胚鼠腭部特定区域生长因子水平影响腭部某些细胞PCD水平，并因此产生腭突瘦小导致腭裂；也有些学者认为糖皮质激素可作用于孕鼠的肾上腺皮质，使ACTH分泌增加，而ACTH能抑制腭突及头部各突起的间充质增生[4]。也有人认为糖皮质激素可能影响腭突的上抬并通过抑制前列腺素产物诱发腭裂，因为前列腺素可能影响肌肉收缩细胞能动性和溶酶体活力，并提出了糖皮质激素受体学说。他在动物实验中证实了糖皮质激素受体是一个致畸胎作用的生物化学位点，该位点可干扰蛋白质的合成[5]。另外，也有学者认为糖皮质激素的致畸作用与胚胎染色体中的某些基因有关，Gasser[6]称之为敏感性基因密码。

人类腭裂与小鼠腭裂在形态发生和病理形成方面有着相似性。小鼠腭裂被认为是一种常用的动物模型[2]。从胚胎学上来讲，腭裂的产生主要体现在以下两个环节:一是在腭器官发育早期，腭突不能上抬或上抬延迟，最终使两侧腭突不能接触而产生腭裂[7];二是在腭器官发育晚期，两侧腭突尽管能够接触，但接触后不能融合或融合后再裂开而产生腭裂[8]。上述两个环节任何一个发生在胚胎发育过程中，都可导致腭裂。在胚胎的发育和形态发生中均存在有细胞凋亡（细胞程序化死亡，PCD），而凋亡模式的改变往往导致畸形的发生。在颅面部发育过程中，新生细胞建立联系是通过细胞迁移、诱导生长及凋亡实现的。

在本实验中，虽有部分注射地塞米松的小鼠建立腭裂模型并未成功以及有部分孕鼠解剖发现死胎、溶胎，这可能与不同小鼠对药物的敏感性、耐受性不同有关，但是总体来看动物模型建立是成功的。从胎鼠腭裂的形态学观察来看，舌体的下降延迟阻碍了腭突的上抬及水平方向相向生长，以至腭突体积瘦小不能向上与鼻中隔相互接触融合，导致了胎鼠腭裂的形成。从本实验结果看，腭器官的形成过程可分为六个时期，分别为：腭器官发生前期、腭突发生期、腭突垂直生长期、腭突上抬及水平生长期、腭突接触融合期、腭器官分化成熟期。腭器官发生前期为地塞米松致畸的敏感阶段，此时地塞米松的注射导致了胎鼠腭裂的形成。

综上所述，本次实验基本建模成功，成功诱导了胎鼠腭裂，产生了完全性腭裂与不完全性腭裂。为进一步研究腭裂发病原因及分子机制提供了动物模型。

【参考文献】1朱江波，张天宝.腭裂动物模型的研究现状[J].国外医学口腔医学分册,2005,32（2）:1331352傅玉川,黄洪章,李祖兵.建立远交系小白鼠胚胎腭裂模型的实验研究[J].现代口腔医学杂志,1994,8（2）：70733AbbottBD，HarrisMW，BirnbaumLS．ComparisonsoftheeffectsofTCDDandhydrocortisoneongrowthfactorexpressionprovideinsightintotheirinteractionintheembryonicmousepalate[J].Teratology，1992，45（1）:354张汇泉.人类畸胎学[M].北京:人民卫生出版社,1987,29:2815DronamrajuKR.Cleftlipandpalate:Aspectsofreproductivebiology[M]．CharlesCThomasPubLtd.1986.811076GasserDL．RecombinantsintheH2s/H2Ointervalofmousechromosoma17definethemappositionofageneforcleftpalatesusceptibilily[J]．Teratology,1988,38:5717AbbottBD，HarrisMW，Birnbaamls.Etiologyofretiaoicacidinduced，cleftpalatevarieswiththeembryonicstage[J].Teratology，1989,40:5335378KitamuraH．Evidenceforcleftpalateasapostfusionphenomenon[J].CleftPalataCraniofacJ，1991,28（2）:195199

转贴于中国论文下载中心http://www.studa.net