肝炎，慢性活动性；脱噬作用；肝
硬化目的研究
病毒性肝炎肝细胞凋亡及与
肝纤维化的关系。方法以原位末端标记及免疫组化检测40例慢
性病毒性肝炎（CH）肝组织细胞凋亡相关线状断裂DNA以及Fas抗原、转化生长因子β1（TGFβ1）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）在肝组织中的表达；以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清可溶性Fas（sFas）及TGFβ1。结果CH肝细胞DNA损伤与肝组织Fas抗原、TGFβ1表达及血清sFas、TGFβ1水平明显相关（r＝0.6219，0.5368，0.5564，0.5996。P＜0.05～0.01）；重度CH及肝硬变患者DNA损伤程度明显高于轻度CH患者，且与肝组织PⅢP、TGFβ1的表达明显相关。结论sFas可能也是促进肝细胞凋亡的因素之一。在肝细胞凋亡的同时伴有胶原等细胞外基质合成的增加，而TGFβ1在细胞凋亡与肝纤维化之间可能起着极为重要的桥梁作用。StudyonrelationshipbetweentheapoptosisofhepatocytesandliverfibrosisofchronicviralhepatitisXINShaojie，ZHAOJingmin，WANGLinjie，etal.【Abstract】ObjectiveTostudytherelationshipbetweenapoptosisofhepatocytesandliverfibrosisofchronicviralhepatitis（CH）.MethodsDNAfragmentation，oneofthecharacteristicfeaturesofapoptosis，wasdetectedbyinsituterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling（TUNEL）andtheexpressionofFas，transforminggrowthfactorβ1（TGFβ1）andPrecollagenⅢpeptide（PⅢP）inlivertissuesweredetectedbyimmunohistochemistry.SolubleFas（sFas）andTGFβ1inserumweredetectedbyELISA.ResultsThedamageofDNAinhepatocytesofCHcorrelatedcloselywiththeexpressionofFasandTGFβ1inlivertissueandserum（r=0.6129，0.5368，0.5564，0.5996;P＜0.05～0.01）.InseveretypeCHandlivercirrhosis，thedegreeofliverfibrosisandtheexpressionofPⅢPandTGFβ1werehigherthanthatinmildtypeandmoderatetypeCH.ConclusionThesFasinserummaybeoneofthefactorsassociatedwiththeapoptosis.TheapoptosisofhepatocytescorrelatedwithliverfibrosisofCHandTGFβ1mayplayanimportantrolebetweenapoptosisandliverfibrosis.【Keywords】hepatitis，Chronicactive；Apoptosis；Livercirrhosis为了解慢性病毒性肝炎（CH）肝细胞凋亡的发生机制及与纤维化关系，我们以原位末端标记（TUNEL）及免疫组化检测了细胞凋亡相关线状断裂DNA、Fas抗原、转化生长因子β1（TGFβ1）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）在肝组织中表达，同时以ELISA检测血清sFas及TGFβ1，探讨了CH肝细胞凋亡及与肝纤维化的关系。1材料和方法1.1研究对象及诊断标准40例病人均为302医院住院病人。男性34例，女性6例，年龄15～73岁。按照1995年北京第五次全国传染病与
寄生虫病学术会议修订的病理诊断标准，其中CH轻度18例，中度11例，重度5例；肝硬变6例，均为死亡患者。病原学诊断，乙型肝炎31例，丙型肝炎6例，乙丙重叠感染3例。肝穿活检前后2d空腹抽血，24h内分离血清，20℃冻存备用。死亡患者死后立即肝穿，同时留取静脉血或心血分离血清。1.2主要试剂及方法TUNEL试验主要试剂与方法：末端脱氧核糖核酸转移酶（TDT）、生物素化dUTP（Bio11dUTP）分别为Progema公司、Sigma公司产品，亲和素辣根过氧化物酶（AvidinHRP）购自华美生物工程公司。方法按文献［1］进行。阳性对照片标记前以0.7mg/mlDNaseⅠ室温处理10min；阴性对照片不加TDT。结果判定参照文献［2，3］按、+、++、+++作半定量记分。肝组织免疫组化采用ABC法，ABC试剂盒购自华美生物工程公司。抗人Fas抗体购自中山公司，结果判定同TUNEL。兔抗人TGFβ1为美国ZYMED公司产品，抗人PⅢP抗体为Sigma公司产品。用彩色医学图像分析仪对切片进行图像处理，以百分比表示阳性反应所占比例。1.3血清sFas和TGFβ1的检测采用ELISA法，试剂盒为美国Genzyme公司产品，操作按说明书。2结果2.1肝细胞凋亡与肝组织及血清Fas、TGFβ1表达的关系表1结果表明，肝细胞凋亡与肝组织及血清Fas、TGFβ1表达明显相关。表1肝细胞凋亡与肝组织及血清Fas抗原及TGFβ1表达关系（±s）Tab.1CorrelationbetweentheapoptosisofhepatocytesandtheexpressionofFasandTGFβ1inserumandlivertissue（±s）*Spearman秩相关检验，P＜0.05Spearman‘stest，P＜0.052.2肝细胞凋亡与肝纤维化关系表2结果表明，肝细胞凋亡程度与肝纤维化程度及TGFβ1、PⅢP在肝组织中的表达明显相关。表2肝细胞凋亡与肝纤维化关系（±s）Tab.2Correlationbetweenapoptosisofhepatocytesandliverfibrosis（±s）*P＜0.01，**P＜0.05目前对慢性病毒性肝炎细胞凋亡机制的研究较多的是FasFas配体系统。Fas抗原在肝细胞凋亡中起重要作用［2，3］。我们的结果表明，CH肝细胞凋亡与肝组织Fas抗原、TGFβ1表达及血清sFas、TGFβ1水平明显相关（表1），提示影响CH肝细胞凋亡是极为复杂的，同时证明在CHsFas可能并不阻断细胞凋亡，而是促进肝细胞凋亡的因素之一。CH肝细胞凋亡的意义尚不十分清楚，DNA损伤程度与肝纤维化程度及肝组织PⅢP、TGFβ1的表达明显相关。PⅢP是Ⅲ型胶原生成细胞的标志［4］，提示在肝细胞凋亡的同时伴有胶原等细胞外基质合成的增加，因此在CH发病机制中细胞凋亡可能与CH肝纤维化的发生有密切关系。TGFβ1与肝纤维化有密切关系，可能通过刺激星状细胞，大量合成细胞外基质，最终导致肝纤维化［4］。同时TGFβ的激活是肝细胞再生终止信号之一［5］，TGFβ是肝细胞发生凋亡的启动因子［6］，本文结果显示TGFβ1与肝细胞凋亡及肝纤维化均有密切关系。因此TGFβ1在CH细胞凋亡与肝纤维化之间可能起着极为重要的桥梁作用。参考文献1，NakagawaS，ShiraishiT，KihaaS，etal.DetectionofDNAstrandbreaksassociatedwithapoptosisinhumanbraintumors.VirchowsArch，1995，427:175179.2，秦波，张定凤，马英，等.乙型肝炎患者肝组织Fas/FasL表达及其在肝细胞凋亡中的作用.中华肝脏病杂志，1997，5：8890.3，朱幼芙，骆抗先，何海棠，等.慢性乙型肝炎肝细胞Fas表达和凋亡.中华肝脏病杂志，1997，5：8687.4，徐冬波，翟为溶，周莜梅，等.细胞因子TGFβ1、PDGFBB、bFGF在人肝纤维化中的作用.上海医科大学，1996，23：203206.5，FaustoN.Hepatocyteapoptosis:istransforminggrowthfactorB1thekissofdeath?Hepatology，1993，18:15361537.6，OberhammerFA，PavelkaM，SharmaS，etal.Inductionofapoptosisinculturedhepatocytesandinregressingliverbytransforminggrowthfactorβ.ProcNatlAcadSciUSA，1992，89:54085412.
