医学论文,病毒性肝炎肝细胞凋亡及与肝纤维化的关系

病毒性肝炎肝细胞凋亡及与肝纤维化的关系

中华实验和临床病毒学杂志2000年第1期第14卷论著

作者：辛绍杰　赵景民　王林杰　王松山

单位：辛绍杰（100039　北京，解放军302医院三科）；赵景民（100039　北京，解放军302医院三科）；王林杰（100039　北京，解放军302医院三科）；王松山（100039　北京，解放军302医院三科）

　　关键词:肝炎，慢性活动性；脱噬作用；肝硬化

　　【摘要】　目的　研究病毒性肝炎肝细胞凋亡及与肝纤维化的关系。方法　以原位末端标记及免疫组化检测40例慢性病毒性肝炎（CH）肝组织细胞凋亡相关线状断裂DNA以及Fas抗原、转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）在肝组织中的表达；以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清可溶性Fas（sFas）及TGF-β1。结果　CH肝细胞DNA损伤与肝组织Fas抗原、TGF-β1表达及血清sFas、TGF-β1水平明显相关（r＝0.6219，0.5368，0.5564，0.5996。P＜0.05～0.01）；重度CH及肝硬变患者DNA损伤程度明显高于轻度CH患者，且与肝组织PⅢP、TGF-β1的表达明显相关。结论　sFas可能也是促进肝细胞凋亡的因素之一。在肝细胞凋亡的同时伴有胶原等细胞外基质合成的增加，而TGF-β1在细胞凋亡与肝纤维化之间可能起着极为重要的桥梁作用。

Studyonrelationshipbetweentheapoptosisofhepatocytesandliverfibrosisofchronicviralhepatitis

XINShaojie,ZHAOJingmin,WANGLinjie,etal.

　　（302HospitalofPLA,Beijing100039,China）

　　【Abstract】　Objective　Tostudytherelationshipbetweenapoptosisofhepatocytesandliverfibrosisofchronicviralhepatitis（CH）.Methods　DNAfragmentation,oneofthecharacteristicfeaturesofapoptosis,wasdetectedbyinsituterminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling（TUNEL）andtheexpressionofFas,transforminggrowthfactorβ1（TGF-β1）andPre-collagenⅢpeptide（PⅢP）inlivertissuesweredetectedbyimmunohistochemistry.SolubleFas（sFas）andTGF-β1inserumweredetectedbyELISA.Results　ThedamageofDNAinhepatocytesofCHcorrelatedcloselywiththeexpressionofFasandTGF-β1inlivertissueandserum（r=0.6129,0.5368,0.5564,0.5996;P＜0.05～0.01）.InseveretypeCHandlivercirrhosis,thedegreeofliverfibrosisandtheexpressionofPⅢPandTGF-β1werehigherthanthatinmildtypeandmoderatetypeCH.Conclusion　ThesFasinserummaybeoneofthefactorsassociatedwiththeapoptosis.TheapoptosisofhepatocytescorrelatedwithliverfibrosisofCHandTGF-β1mayplayanimportantrolebetweenapoptosisandliverfibrosis.

　　【Keywords】　hepatitis,Chronicactive；Apoptosis；Livercirrhosis

　　为了解慢性病毒性肝炎（CH）肝细胞凋亡的发生机制及与纤维化关系，我们以原位末端标记（TUNEL）及免疫组化检测了细胞凋亡相关线状断裂DNA、Fas抗原、转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅲ型前胶原肽（PⅢP）在肝组织中表达，同时以ELISA检测血清sFas及TGF-β1，探讨了CH肝细胞凋亡及与肝纤维化的关系。

　　1　材料和方法

　　1.1　研究对象及诊断标准　40例病人均为302医院住院病人。男性34例，女性6例，年龄15～73岁。按照1995年北京第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病理诊断标准，其中CH轻度18例，中度11例，重度5例；肝硬变6例，均为死亡患者。病原学诊断，乙型肝炎31例，丙型肝炎6例，乙丙重叠感染3例。肝穿活检前后2d空腹抽血，24h内分离血清，-20℃冻存备用。死亡患者死后立即肝穿，同时留取静脉血或心血分离血清。

　　1.2　主要试剂及方法　TUNEL试验主要试剂与方法：末端脱氧核糖核酸转移酶（TDT）、生物素化dUTP（Bio-11-dUTP）分别为Progema公司、Sigma公司产品，亲和素-辣根过氧化物酶（Avidin-HRP）购自华美生物工程公司。方法按文献［1］进行。阳性对照片标记前以0.7mg/mlDNaseⅠ室温处理10min；阴性对照片不加TDT。结果判定参照文献［2，3］按-、+、+　+、+　+　+作半定量记分。肝组织免疫组化采用ABC法，ABC试剂盒购自华美生物工程公司。抗人Fas抗体购自中山公司，结果判定同TUNEL。兔抗人TGF-β1为美国ZYMED公司产品，抗人PⅢP抗体为Sigma公司产品。用彩色医学图像分析仪对切片进行图像处理，以百分比表示阳性反应所占比例。

　　1.3　血清sFas和TGF-β1的检测　采用ELISA法，试剂盒为美国Genzyme公司产品，操作按说明书。

　　2　结果

　　2.1　肝细胞凋亡与肝组织及血清Fas、TGF-β1表达的关系　表1结果表明，肝细胞凋亡与肝组织及血清Fas、TGF-β1表达明显相关。

表1　肝细胞凋亡与肝组织及血清Fas抗原及TGF-β1表达关系（

　　Tab.1　CorrelationbetweentheapoptosisofhepatocytesandtheexpressionofFasandTGF-β1inserumandlivertissue（

　　ExpressionofFas

　　ExpressionofTGF-β1

　　LevelofsFas

　　LevelofTGF-β1

　　*Spearman秩相关检验,P＜0.05

　　Spearman'stest,P＜0.05

　　2.2　肝细胞凋亡与肝纤维化关系　表2结果表明，肝细胞凋亡程度与肝纤维化程度及TGF-β1、PⅢP在肝组织中的表达明显相关。

表2　肝细胞凋亡与肝纤维化关系（

　　Tab.2　Correlationbetweenapoptosisofhepatocytesandliverfibrosis（

　　目前对慢性病毒性肝炎细胞凋亡机制的研究较多的是Fas-Fas配体系统。Fas抗原在肝细胞凋亡中起重要作用［2，3］。我们的结果表明，CH肝细胞凋亡与肝组织Fas抗原、TGF-β1表达及血清sFas、TGF-β1水平明显相关（表1），提示影响CH肝细胞凋亡是极为复杂的，同时证明在CHsFas可能并不阻断细胞凋亡，而是促进肝细胞凋亡的因素之一。CH肝细胞凋亡的意义尚不十分清楚，DNA损伤程度与肝纤维化程度及肝组织PⅢP、TGF-β1的表达明显相关。PⅢP是Ⅲ型胶原生成细胞的标志［4］，提示在肝细胞凋亡的同时伴有胶原等细胞外基质合成的增加，因此在CH发病机制中细胞凋亡可能与CH肝纤维化的发生有密切关系。TGF-β1与肝纤维化有密切关系，可能通过刺激星状细胞，大量合成细胞外基质，最终导致肝纤维化［4］。同时TGF-β的激活是肝细胞再生终止信号之一［5］，TGF-β是肝细胞发生凋亡的启动因子［6］，本文结果显示TGF-β1与肝细胞凋亡及肝纤维化均有密切关系。因此TGF-β1在CH细胞凋亡与肝纤维化之间可能起着极为重要的桥梁作用。

　　参考文献

　　1，NakagawaS,ShiraishiT,KihaaS,etal.DetectionofDNAstrandbreaksassociatedwithapoptosisinhumanbraintumors.VirchowsArch,1995,427:175-179.

　　2，秦波，张定凤，马英，等.乙型肝炎患者肝组织Fas/FasL表达及其在肝细胞凋亡中的作用.中华肝脏病杂志，1997，5：88-90.

　　3，朱幼芙，骆抗先，何海棠，等.慢性乙型肝炎肝细胞Fas表达和凋亡.中华肝脏病杂志，1997，5：86-87.