结石性胆囊胆汁厌氧菌的检测卢云石景森卓健生
摘要：目的探讨不同种类厌氧菌在结石性胆囊胆汁中的分布及其临床价值。方法对67例结石性胆囊胆汁进行厌氧菌培养和自动检测分析。结果各型厌氧菌的总检出率为55.2%美国ORGANONTEKNIKA公司产品。SCEPTOR微生物鉴定系统美国BECIONDICKINSON公司产品。
1.3方法
1.3.1标本采集术中采用一次性无菌注射器穿刺病变胆囊，取胆汁5～10ml，1min内注入BacT/Aler厌氧增菌瓶。
1.3.2增菌将厌氧增菌瓶放入BacT/Alert恒温震荡培养箱自动培养1～6d，底部感应器显示为阳性者根据其微生物生长曲线，于对数生长期取出做转种；培养6d仍为阴性者，视为厌氧菌阴性。
1.3.3培养及鉴定快速接种到厌氧琼脂板上后，置厌氧罐孵育，48h后取出，制备108/ml标准厌氧菌菌悬液，取10μl放入10ml增菌管内，转种到SCEPTOR厌氧板。厌氧培养48h后，直接在SCEPTOR微生物鉴定仪中确定厌氧菌种。
本组所有病例厌氧培养同时行胆汁需氧菌培养。2结果2.1培养结果
67例结石性胆囊胆汁中单纯分离到厌氧菌4例，单纯分离出需氧菌14例，同时分离到厌氧、需氧菌者33例。累积计算，厌氧菌阳性检出率为55.2%，需氧菌为70.1%；细菌总检出率76.1%。
67例厌氧培养共分离到厌氧菌42株，分归8个菌属，其中脆弱类杆菌占厌氧菌株的40.5%。附表67例胆结石相应胆汁细菌菌株培养鉴定结果厌氧菌株数需氧菌株数革兰氏阴性杆菌size=4>革兰氏阴性杆菌脆弱类杆菌17大肠埃希氏菌22变形梭杆菌3肺炎克雷白菌4革兰氏阳性杆菌鼻臭克雷白菌2痤疮丙酸杆菌4费氏枸盐酸杆菌2贪婪丙酸杆菌2绿脓假单胞菌2颗粒丙酸杆菌NT>2变形杆菌6艰难梭菌2哈夫尼亚杆菌2产气荚膜梭菌5产气肠杆菌1放线杆菌1革兰氏阳性球菌革兰氏阴性球菌金葡萄球菌7小韦荣氏球菌1肠球菌1革兰氏阳性球菌粪链球菌5厌氧消化链球菌2厌氧性链球菌2黑色消化球菌1合计42合计542.2结石类型与细菌定性分析
48例胆固醇为主的混合性结石患者中胆汁厌氧菌阳性者21例次，需氧菌阳性者29例次；19例胆色素为主混合性结石中厌氧菌阳性者16例次，需氧菌阳性者18例次。
3讨论正常人胆汁是无菌的，尤其是胆囊胆汁。胆道厌氧菌多来自胃肠道的内源性感染，由于是条件致病菌，只有在胆道需氧菌感染严重，机体
免疫力降低，厌氧菌获得适当生长环境时才能繁殖生长，故
厌氧菌感染绝大多数并发需氧菌感染，本组为76.1%。二者互相作用使
胆道感染加重，增加了其复杂性及难治性［2］。
本组需氧菌株主要以大肠杆菌及肠球菌为主，二者对胆汁的耐受性较强，一旦侵入胆系，易于存活形成炎症，继而与细菌抗体复合物等可初步形成
胆石核心。同时这些细菌可产生β葡萄糖醛酸酶，使胆汁内可溶性葡萄糖醛酸胆红素转变为葡萄糖醛酸和不溶性胆红素，也构成了胆石的核心成分。厌氧菌在胆色素结石形成中的作用主要是由于脆弱类杆菌、梭形杆菌等厌氧菌可产生与大肠杆菌相同的β葡萄糖醛酸酶，从而分解结合胆红素后，与钙等金属离子结合形成胆红素结石［3］。本组胆色素混合性结石中厌氧菌阳性率高达84.2%，也验证了这一点。细菌与胆固醇结石形成的联系也日益受到重视［4］，人们通过聚合酶链反应等方法证实胆固醇结石核心有细菌DNA存在，非凡是存在痤疮丙酸杆菌等厌氧菌DNA。本组中4株痤疮丙酸杆菌的检出，同胆固醇结石厌氧菌DNA结果相吻合，为厌氧菌在胆固醇结石形成中的作用提供了一定的依据，但有待于进一步的探讨。
厌氧菌培养过去多采用忍天青液增菌瓶送检，操作复杂且标本触氧时间较长。本组采用厌氧增菌瓶术中直接注入法，触氧时间不到30s。同时根据厌氧菌自动生长曲线的4个生长时期即迟缓期、对数生长期、稳定期和衰退期进行培养，在其生长最旺盛的对数生长期进行转种，可提高阳性培养率。本组观察该期时间多集中于增菌后6～24h内，此时尽管多数增菌瓶仍保持较清亮状态，但细菌培养阳性率高达95%。同时由于对厌氧菌株采用微生物鉴定仪自动读板鉴定，避免了使用API20/10系统所导致的系统误差。本组培养出4株专性厌氧菌，每株均通过2次需氧实验证实，该4例胆石病人有两个共同特点：一是均有慢性
胆囊炎病史，病程均在2年以上；二是都曾经多种抗生素治疗，疗效均不显著。Jackaman［5］对73份胆汁行厌氧培养，仅1例专性厌氧，估计与当时的技术有关。本组曾对10份厌氧阳性的胆汁同时采用无氧忍天青增菌瓶方法进行培养，结果仅6例培养阳性。认为随着厌氧培养技术的改进、胆汁厌氧菌谱研究的深入，厌氧菌在胆道系统所起的作用会逐渐被揭示。
