无泵驱动体外膜肺治疗犬急性呼吸衰竭时的内皮素论文

【关键词】呼吸功能不全；,,,内皮素　　Dynamicchangeofendothelins1inplasmaandlungtissueofdogswithacuterespiratoryfailuretreatedwithpumplessextracorporealmembraneoxygenation　　【Abstract】AIM:Tostudythedynamicchangeoftheendothelins1（ET1）inplasmaandlungtissueofdogswithacuterespiratoryfailure（ARF）treatedbybilateralfemoralarteriovenousextracorporealmembraneoxygenation（bAVECMO）.METHODS:Atotalof10ARFdogmodelsweretreatedbythebAVECMO.Rightatriumbloodandlungtissuewerecollectedatdifferenttime（beforeexperiment,whenmodelswereestablished,1,2,3,4hduringECMO）.ET1wasdetecteddynamicallybyradioimmunologicalandimmunohistochemicalmethodsduringbAVECMO.RESULTS:ET1contentinplasmawasdescendentfromtheoriginallevel（themomentwhenthemodelswerecompleted），wentbackat1handpeakedat2h,thenitdescended.ET1contentinlunghomogenategettothepeakat2handthenstartedtodecrease.ThestatisticalanalysisshowedET1contentsinplasmaorlungtissuechangedsignificantlybetweenpreandpostECMO.CONCLUSION:ThebAVECMOhasapositivesignificanceintheearlytreatmentofARF.　　【Keywords】respiratoryinsufficiency；endothelins1；bilateralfemoralarteriovenousextracorporealmembraneoxygenation　　【摘要】目的:观察双侧股动脉股静脉无泵驱动体外膜肺（bAVECMO）治疗急性呼吸衰竭犬,血浆及肺组织内皮素1（ET1）的表达变化.方法:10只犬在建立急性呼吸衰竭模型情况下给予bAVECMO治疗.分别于实验开始前、模型建立完成时、转流开始后1，2，3，4h取肺组织及血浆.应用放免、免疫组化,观测bAVECMO期间血浆、肺组织匀浆ET1变化,及与组织损伤的关系.结果：犬ARDS模型血浆ET1含量在原有基础上（模型完成时）先降低，1h后开始回升，2h达到高值，之后缓慢下降；肺组织匀浆ET1含量转流2h达到高值，之后缓慢下降.统计分析表明匀浆和血浆各自ET1的均数在转流前后差异有统计学意义.肺组织匀浆ET1转流3h与4h差异无统计学意义.结论：对于急性呼吸衰竭bAVECMO的早期治疗有积极意义.　　【关键词】呼吸功能不全；内皮素1；双侧股动脉股静脉无泵驱动体外膜肺　　0引言　　在对急性呼吸衰竭（ARF）和急性呼吸窘迫综合症（ARDS）的研究中，人们发现ARF，ARDS时内皮素1mRNA表达显著增强，说明ET1参与了急性肺损伤的病理生理过程.在对ARF，ARDS的治疗中无泵驱动体外膜肺辅助（AV）转流技术（AVECMO）由于其有效并对血液有形成分破坏轻等优点，已被应用于临床［1］.在应用AVECMO转流中，国外均采用单侧股动脉股静脉ECMO转流，在临床中表现了一定的不足，如引流量不够大，影响了AVECMO的效果；但如应用大口径动脉插管来增加动脉引流，则会严重影响插管侧下肢血液供应等.本项研究首次采用双侧股动脉股静脉无泵驱动体外膜肺（bAVECMO）转流技术，通过治疗犬急性呼吸衰竭模型，观察血浆、肺组织ET1的变化，为临床提供参考依据.　　1对象和方法　　1.1实验动物的准备选择健康成年家犬10只，雌雄不限，体质量为18~35（平均23.4±4.7）kg,应用35g/L的苯巴比妥100mg/kg进行腹腔注射行全身麻醉，待犬意识不清时，行气管插管与麻醉机连接.常规消毒铺巾，分别解剖犬左、右两侧的股动脉及股静脉，全身肝素化静脉注射肝素，用量为1mg/kg体质量，股动脉，股静脉上、下两端分别套丝线，结扎下端的股动脉、股静脉.阻断股动脉、股静脉上端，在阻断与结扎血管的中下端，切开血管.根据动、静脉内径的大小选择不同型号的PVC动、静脉插管，插管后结扎固定以防止脱出，常规缝合皮下、皮肤，防止伤口处渗血.将动、静脉插管与bAVECMO装置连接.右侧胸部开胸沿着第4肋间进胸，切开心包分别将心包固定在切口边缘，主动脉根部置入测压针管及测压装置，将此装置与飞利浦有创血压、心率动态监护仪连接.当bAVECMO转流时，通过bAVECMO端口应用1000mL/L氧气，其用量为（1.2±0.4）L/min.　　1.2标本采集建立循环后，根据不同的转流时间收集标本.①在体外循环开始前，经胸部切口取右肺下叶少许组织（10mm×10mm），置液氮罐待检测.②制作呼吸衰竭动物模型进行试验.应用潘克罗宁（Pancuronrum）（一般情况下0.1～0.2mg/kg体质量），20kg左右的犬首次剂量为4mg，以后每30min.左右追加2mg使呼吸完全消失.通过麻醉机调节呼吸频率和潮气量（犬在安静状态下潮气量如体重在16.4～30.5kg，其潮气量多在251～432mL）.采用血气分析仪测定犬动脉血pH值、动脉血氧分压、动脉血氧饱和度及动脉血二氧化碳分压（PaCO2）值，当达到呼吸衰竭指标时，经右心房抽血10mL于注射器内，立即密封置冰盒待检.另经胸部切口取右肺下叶少许组织（10mm×10mm），置冰盒后待检测.开始bAVECMO转流实验后1，2，3，4h，分别经右心房抽血10mL，胸部切口取右肺下叶少许组织（10mm×10mm），置液氮罐待检测.　　1.3样品制备及测定方法①血浆及肺组织匀浆ET1含量测定:采用SN695型全自动γ计数器（上海原子核所，放射免疫药盒购自解放军总医院科技开发中心放免所）,以放射免疫法测定标本ET1含量.②内皮素1含量的免疫组化分析，摘取肺脏用甲醛固定,制作石蜡切片,HE染色,观察肺脏光镜下病变;并用链霉菌亲生物素蛋白过氧化物酶免疫组化染色法（SP方法）进行免疫组化染色（按试剂盒说明书操作）.　　统计学处理：实验数据以x±s表示，血浆及肺组织ET1的组内分析采用重复测量方差分析.P<0.05有统计学意义.　　2结果　　2.1肺组织内皮素浓度如表所示血浆ET1含量在原有基础上（模型完成时）先降低，1h后开始回升，2h达到高值，之后缓慢下降；肺组织匀浆ET1含量转流2h达到峰值，之后缓慢下降.重复测量方差分析表明匀浆和血浆各自ET1的均数在转流前后有显著差异.肺组织匀浆ET1转流3h与4h已无显著差别（表1）.表1血浆及肺组织ET1在转流期间变化（略）　　2.2免疫组化结果结果评定以细胞浆或细胞膜呈现棕黄色颗粒状，且着色明显高于背景或背景不着色而细胞着色者为表达阳性（图1）.免疫组化染色呈阳性反应（棕黄色着色）的部位：①小细支气管壁、终末细支气管壁上皮细胞及周围平滑肌细胞胞浆和胞膜；②小血管壁周围平滑肌细胞胞浆、纤维组织和结缔组织；③巨噬细胞胞浆.无泵驱动体外膜肺治疗犬急性呼吸衰竭时的内皮素