巨细胞动脉炎患者血管白介素6与信号传递子和转录激活子3的表达水平及其相关性

作者：谷绍娟，胡治平作者单位：410013长沙，中南大学湘雅二医院神经内科（谷绍娟现在中南大学湘雅三医院神经内科）

【摘要】　　目的研究巨细胞动脉炎（GCA）患者血管白介素6（IL6）与信号传递子和转录激活子3（STAT3）蛋白的表达水平及其相关性。方法用免疫组化方法，检测20例GCA和6例其他神经系统疾病患者（对照组）颞动脉中IL6和STAT3蛋白的表达。同时记录GCA患者6项与炎症有关的指标，分为炎症指标≥3项组（7例）与≤2项组（13例）。并分析IL6与STAT3蛋白表达水平的相关性。结果GCA组颞动脉IL6阳性细胞评分、STAT3阳性细胞数分别为（2.85±0.75）分及（40.71±9.90）个/高倍视野，显著高于对照组［（2.00±0.63）分，（30.73±10.84）个/高倍视野］（均P<0.05）；GCA组炎症指标≥3项组IL6、STAT3蛋白的表达水平显著高于炎症指标≤2项组（P<0.01，P<0.05）；IL6与STAT3蛋白表达水平呈正相关（r=0.883，P<0.05）。结论GCA患者血管IL6、STAT3蛋白表达水平显著增高；两者表达水平呈正相关；提示IL6可促进STAT3的表达。

【关键词】巨细胞动脉炎白介素6信号传递子和转录激活子3血管平滑肌

　　Expressionsanditsrelationshipofvascularinterleukin6andsignaltransducerandactivatoroftranscription3inpatientswithgiantcellarteritis

　　GUShaojuan,HUZhiping.

　　DepartmentofNeurology,theSecondXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha410013,China　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheexpressionsanditsrelationshipofvascularinterleukin6（IL6）andsignaltransducerandactivatoroftranscription3（STAT3）proteiningiantcellarteritispatients.MethodsTheexpressionsofIL6andSTAT3proteinweredetectedbyimmunohistochemistryinthetemporalarterybiopsyspecimensof20patientswithgiantcellarteritisand6patientswithothernervesystemdiseases（controlgroup）.Sixindexsrelatedtoinflammationingiantcellarteritispatientswererecorded.Giantcellarteritispatientsweredividedintothegroupthat≥3positiveindexs（7cases）andthegroupthat≤2positiveindexs（13cases）.TherelationshipbetweenexpressionsofIL6andSTAT3proteinwasanalysed.ResultsComparedwithcontrolgroup［（2.00±0.63）score，（30.73±10.84）cell/H］,theexpressionsofIL6andSTAT3proteinintemporalarteryweresignificantlyincreasedingiantcellarteritisgroup［（2.85±0.75）score，（40.71±9.90）cell/H］（allP<0.05）.Moreover,theexpressionsofIL6andSTAT3proteininthepatientswhohad≥3positiveindexswereevidentlyincreasedthantheoneswhohad≤2positiveindexs（P<0.01，P<0.05）.TherewasapositivecorrelationbetweenexpressionsofIL6andSTAT3protein（r=0.883，P<0.05）.ConclusionsTheexpressionsofIL6andSTAT3proteininthetemporalarteryofgiantcellarteritispatientsareprominentlyincreased,andthereispositiverelationshipbetweenthem,whichsuggeststhatIL6mayupregulatetheexpressionofSTAT3.　　Keywords：Giantcellarteritis;interleukin6;signaltransducerandactivatoroftranscription3;vascularsmoothmuscle

　　巨细胞动脉炎（GCA）又称颞动脉炎、颅动脉炎和肉芽肿性动脉炎，是一种原因不明的系统性坏死性血管炎。GCA的病因研究一直为各国学者关注，目前主要认为免疫机制参与了GCA的发生与发展［１］。本研究对20例GCA及6例其他神经系统疾病患者（对照组）的颞动脉白介素（IL）6蛋白和信号传递子和转录激活子（STAT）3蛋白表达水平进行检测，并分析其相关性。现报告如下。

　　1对象与方法

　　1.1对象（1）GCA组：系1999年7月～2001年10月就诊于中南大学湘雅二医院神经内科的20例GCA患者，男17例，女3例；年龄32～73岁，平均（48.7±10.7）岁；病程41～103d，平均（65.4±15.9）d；均符合1990年美国风湿病学会的5项经典诊断标准。同时，按系统性炎症反应程度相关的6项指标：低热、消瘦（≥4kg）、血沉增快（≥50mm/h）、C反应蛋白增高、贫血和白细胞数增高，将患者分为≥3项指标组（7例）和≤2项指标组（13例）。（2）对照组：同期住院的6例其他神经系统疾病患者（脑外伤、颅咽管瘤、胶质瘤、动脉硬化性脑梗死、淋巴瘤和鼻咽癌各1例），男5例，女1例；年龄30～73岁，平均（45.6±14.8）岁。

　　1.2方法

　　1.2.1颞动脉活检入组者均进行一侧颞动脉活检。患者仰卧位，偏侧头位，以颞浅动脉（尽可能选择有触痛或有结节的部位）为活检部位，常规消毒铺巾，戴无菌手套，以2％利多卡因沿颞浅动脉走行处局部浸润麻醉，麻醉满意后，沿颞浅动脉走行切开皮肤约3～4cm，钝性分离颞浅动脉，两端分别结扎，剪取结扎之间的动脉段约2～3cm，缝合皮肤。

　　1.2.2免疫组化染色动脉标本石蜡包埋，4μm连续切片；52℃恒温箱烤24h；二甲苯脱蜡至水，蒸馏水洗3×5min；3％H2O2阻断20min，蒸馏水洗3×5min；加入0.01mmol/L柠檬酸微波修复10min，于室温冷却；抗原修复液修复10min，PBS洗3×5min；正常羊血清封闭液封闭20min，PBS洗3×5min；滴加一抗（1∶100）;4℃过夜；PBS洗3×5min，加生物素标记二抗工作液孵育20min，PBS洗3×5min；加试剂SABC孵育20min，PBS洗3×5min；DAB镜下显色；自来水洗净；苏木素复染；梯度乙醇脱水；二甲苯透明；封片；光镜观察；照相。用随试剂提供的照片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.2.3结果判定标准IL6阳性细胞为镜下见胞浆内有综褐色颗粒，IL6表达的量化依照HernandezRodriguez的判定标准，以高倍镜下（×400）中膜平滑肌层的阳性细胞百分数来判定：没有染色为0分；≤25%为1分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；76%～100%为4分。STAT3的量化标准为:以细胞浆着棕褐色颗粒为阳性，每张切片选取中膜平滑肌层的动脉区域，计数5个高倍视野的阳性细胞数，取平均值。

　　1.2.4统计学方法检测结果用均数±标准差（±s）表示，采用SPSS11.0统计软件进行分析，同一变量两样本均数比较用成组设计的t检验；两变量间相关关系用直线相关分析，计算Pearson相关系数。

　　2.1两组颞动脉IL6和STAT3表达比较见表1。GCA组患者颞动脉标本中均可见IL6蛋白和STAT3蛋白的表达（均为胞浆染色），广泛分布在血管内膜、中膜和外膜，在中膜肌层尤为明显。对照组IL6蛋白和STAT3蛋白在颞动脉内膜和中膜均有表达，以中膜血管壁平滑肌细胞表达明显。GCA组IL6和STAT3蛋白的表达强度呈中～强阳性，对照组呈弱～中阳性，两组差异有统计学意义（均P<0.05）。GCA组IL6阳性细胞较为多样：在中膜，大部分IL6阳性细胞为平滑肌细胞；在内膜，尤其是呈强阳性表达的患者中，纤维母细胞也表达IL6蛋白；内膜、中膜交界处可见强阳性表达的淋巴细胞浸润。见图1、2。

　　表1GCA组与对照组颞动脉中膜层IL6和STAT3表达水平的比较（略）

　　注：与对照组比较*Ｐ<0.05

　　图1GCA组颞动脉有较多IL6阳性细胞（胞浆中有综褐色颗粒）（DAB×200）（略）

　　图2GCA组颞动脉有较多STAT3阳性细胞（胞浆中有综褐色颗粒）（DAB×200）（略）

　　2.2GCA炎症指标≥3项组与≤2项组颞动脉IL6和STAT3蛋白表达的比较见表2。GCA组炎症指标≥3项组IL6和STAT3蛋白阳性表达水平［（3.43±0.54）分，（49.18±9.05）个/高倍视野］显著高于炎症指标≤2项组［（2.54±0.66）分,（39.25±8.33）个/高倍视野］（P<0.01,P<0.05）。

　　表2GCA炎症指标≥3项组与≤2项组IL6和STAT3表达水平比较（略）

　　注：与炎症指标≤2项组比较*P<0.05，△P<0.01

　　2.3IL6和STAT3蛋白表达水平的相关性GCA患者颞动脉IL6蛋白与STAT3蛋白表达水平呈正相关（r=0.883，P<0.05）。