◆用抑制性差减杂交构建新疆Kaposi肉瘤差异表达基因文库,Kaposi肉瘤

时间 : 2009-12-03 17:26:18 来源：www.biochemlab.cn

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[摘要]

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用抑制性差减杂交构建新疆Kaposi肉瘤差异表达基因文库Kaposi肉瘤,抑制性差减杂交,差异基因,基因克隆,李冬妹,杨磊,仙玲玲,谭晓华,李锋,应康,普雄民,王小波,何玲,LIDong-mei,YANGLei,XIANLing-ling,TANXiao-hua,LIFeng,YINGKang,PUXiong-min,WANGXiao-bo,HELing,Kaposi肉瘤目的:分离卡波氏肉瘤（Kaposi'ssarcoma,KS）差异表达基因,并建立相应的cDNA文库,为从分子水平揭示KS发病机制打下良好基础.方法:采集KS肉瘤及来源于同一患者的正常皮肤组织,抽提总RNA,逆转录酶合成dscDNA,经RsaI酶切,与2种不同的接头衔接,分别以正常组织和肿瘤组织作为tester和driver,进行双向抑制性差减杂交（suppressionsubtractivehybridization,SSH）,初步筛选KS肉瘤与正常皮肤差异表达基因,将差异基因PCR扩增,产物与pGEM-Teasy克隆载体连接,转化DH5α大肠杆菌,采用蓝白斑筛选,获得白色阳性克隆菌落,并煮沸破菌,PCR扩增出未知基因片段.结果:差减得到差异基因片段多位于200～500bp,成功构建了2个分别代表在KS肿瘤组织中表达上调和下调的基因文库.结论:经双向抑制性差减杂交获得了KS差异表达基因文库.抑制性差减杂交是一种快速、方便、有效的建立差异基因文库的方法.ConstructionofDifferentialLibraryofXinjiangKaposisSarcomabySuppressionSubtractiveHybridization
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