220例无精子症和严重少精子症患者遗传学分析推荐到首页 □鄂伟韩维田郭廷超 《中国性科学》2009年第05期1/3页123
【摘要】目的:检查无精子、严重少精子患者的
染色体异常和Y染色体上无精子基因（AZF）微缺失的遗传缺陷。方法:应用外周血培养和聚合酶链反应（PCR）技术,对220例无精子、严重少精子患者的染色体和11个AZF基因位点进行检查。结果:在140例无精子患者中,发现19例患者染色体异常,异常率为13.57%。有21例患者有AZF基缺失,总缺失率为20.31%,AZFa、AZFb、AZFc缺失率分别为2.38%、4.76%、16.67%。在80例严重少精子患者中,有14例患者有AZF基因缺失,总缺失率为17.50%,AZFb和AZFc的基因片段缺失率分别为1.25%和17.50%。未发现有染色体异常和AZFa缺失。结论:染色体异常和无精子基因微缺失是导致无精子症、少精子症主要因素,遗传学检查对
男性不育患者的病因诊断与治疗有着重要价值。
【关键词】不育症;男性;Y染色体;AZF;无精子症;少精子症
已婚育龄夫妇
不孕症的发病率高达10%~15%,其中男性不育约占40%,特发性无精子症和严重少精子是男性不育的主要类型。引起无精子或严重少精子的原因极其复杂,遗传缺陷是其中的重要原因之一。男性无精子和严重少精子患者除染色体异常外,Y染色体长臂有控制精子生成的无精子因子（Azoospermiafactor,AZF）,这一区域的基因微缺失与无精子和严重少精子密切相关。我们通过对无精子症和严重少精子患者外周血染色体和Y染色体上AZF缺失的检测,探讨了引起无精子和少精子的遗传因素和AZF缺失与表型效应的关系,现报告如下。
1材料与方法
1.1研究对象
来自我院不育门诊就诊的男性不育患者。根据世界卫生组织标准进行精液常规分析、果糖测定、精
液脱落细胞学检查等,并排除
继发感染、输精管缺如、其它睾丸外伤等病症,经确诊为无精子或严重少精子病例作为研究对象。无精子症140例,严重少精子患者80例。按设计表格逐一填写个人一般状况、个人发育史、生育史、既往病史、体格检查等情况。无精子症和严重少精子病例年龄22~40岁,平均29.03±3.35岁。以我院优生门诊和沈阳市第一医院妇产科有正常生育史患者的丈夫30例为对照组,以10例正常女性为阴性对照组,年龄24~35岁,平均28.12±2.83岁。
1.2方法
1.2.1精液分析
根据世界卫生组织精液评估标准,每例患者重复两次以上检测,留取标本前应禁欲3~5天。无精子患者,经连续三次精液分析,并经离心沉淀均无精子者确诊为无精子症,并排除继发感染、输精管缺如、其它睾丸外伤等病症。精子密度低于5×106/ml为严重少精子症。
1.2.2激素测定
采用SEROZYMEI磁分离酶联免疫测试仪（瑞士）测定血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）激素,试剂为SEROZYME专用进口试剂。
1.2.3染色体检查
采用本室常规外周血染色体检查方法,镜下每例计数30个分裂相,G染色体显带核型分析5个。
1.2.4Y染色体上缺失基因检测
1.2.4.1无精子基因引物
根据文献资料,在Y染色体长臂5~6区30个基因片段位点分别选择了引物AZFa区sY84、sY86,AZFb区sY102、sY134,AZFc区sY147、sY153、sY157和RBM,引物由中国科学院微生物研究所合成。它们的PCR扩增产物DNA长度分别为326bp、320bp、218bp、301bp、100bp、139bp、285bp和825bp。
1.2.4.2PCR反应检测分析1）标本DNA提取:采集患者外周血3ml,肝素抗凝,3000rpm离心20min,取白细胞层加入等量的裂解缓冲液,充分混悬。15000rpm离心3min,去上清,沉淀加入1ml裂解液,重复1~2次,常规法提取DNA备用。
2）反应条件:25μl反应体系100μl10×缓冲液（10mMTris-HCl,pH8.3,500mMKCl,15mMMgCl2）,8μldNTP混合物（每种核苷酸12.5mM）,DNA聚合酶8μl（5UI/μl）,引物浓度按每反应体系50pmol加入超纯水295μl;混合后分装每反应管22μl,加入模板DNA3μl。在PE480PCR扩增仪进行基因扩增。94℃预变性5min,94℃30sec,54℃45sec,65℃120sec,共完成45个循环,最后65℃5min延伸,PCR扩增产物置4℃冰箱中储存。3）产物检测分析:1/3页123评论（0篇）
