涎腺肿瘤C

作者：孙宏晨　吴珊　欧阳喈　文章来源：中华口腔医学杂志　

　　【摘要】　目的　探讨C-erbB-2mRNA表达水平同涎腺肿瘤组织类型、发生和生物学性质的关系。方法　采用Dotblot杂交，以32P标记的寡核苷酸探针，以正常涎腺为对照，对涎腺肿瘤C-erbB-2mRNA表达进行研究。结果　正常涎腺和涎腺肿瘤中发现不同程度C-erbB-2mRNA的表达，以正常涎腺组织的表达水平为基准，在腺淋巴瘤、基底细胞腺瘤呈现低表达、无表达或与正常涎腺组织表达水平相似，多形性腺瘤、粘液表皮样癌、腺泡细胞癌、腺样囊性癌、乳头状囊腺癌和肌上皮癌则呈现不同程度的过表达。结论　C-erbB-2表达水平同涎腺肿瘤的生物学性质有关。　　C-erbB-2癌基因最初由Shin从大鼠神经胶质瘤中分离，它定位于人类染色体17q21上，编码的蛋白质与表皮生长因子受体相似，具有酪氨酸激酶活性，广泛分布于皮肤、肌肉、骨、涎腺、乳腺、胃、肠、肺及卵巢等组织脏器。我们采用Dotblot杂交以32P标记的寡核苷酸探针对涎腺良性、恶性肿瘤进行C-erbB-2mRNA表达研究，以探讨C-erbB-2mRNA的表达同涎腺肿瘤组织类型、发生和生物学性质的关系。

　　材料和方法

　　1.探针:为跨人类C-erbB-2癌基因外显子6、7的28个寡核苷酸，序列为5'-CCCAAGTCCTCATTCTACCTGGATGACC-3'，经T4多核苷酸激酶标记系统（promeg公司）以32P（ATP）对其5'末端进行标记。

　　2.组织:表1。

表1　C-erbB-2癌基因mRNA表达（例）分组例数-+++正常组织　腮腺4040　颌下腺5050涎腺良性肿瘤　腺淋巴瘤4220　基底细胞腺瘤3300　多形性腺瘤120012涎腺恶性肿瘤　粘液表皮样癌9207　乳头状囊腺癌6006　腺泡细胞癌4013　腺样囊性癌4004　肌上皮癌2002

3.RNA的提取:常规尿素氯化锂法的基础上增加一步蛋白酶K消化1h的改良方法，定量以瑞典产RNA/DNACalculator进行。

　　4.Dotblot杂交：每种组织的RNA样品15μg常规行变性处理，点样量为60.00、30.00、15.00、7.50、3.75及1.88μl。65℃条件下预杂交7h（预杂交液内含5XSSC，5XDenhardt液，50mmol/L磷酸缓冲液，0.2%SDS）。将32P标记的探针加入到上述预杂交液中，65℃杂交12h，常规漂洗。于－70℃曝光24h。在暗室中X线片显影，定影。

　　1.正常组织：9例正常涎腺组织均阳性，各例正常涎腺组织阳性程度基本相似，以正常涎腺的阳性程度为标准，评价良、恶性肿瘤的表达水平（表1）。

　　2.良性肿瘤：腺淋巴瘤、基底细胞腺瘤的信号强度与正常涎腺相似，2例腺淋巴瘤表达水平比正常涎腺低甚至未见表达。与此相对，在所有的多形性腺瘤组织，其C-erbB-2mRNA水平均呈现高表达。