消敏颗粒对Ⅰ型超敏反应模型大鼠血清IgE含量及脾细胞IFN

作者：李忻红，王惠国，关洪全

【摘要】　　目的研究消敏颗粒抗大鼠Ⅰ型超敏反应的免疫学机制。方法用卵白蛋白与AI（OH）悬液的混合液致敏和诱发，制成Ⅰ型超敏反应动物模型。将实验动物随机分组，即正常组、模型组、消敏颗粒低、高剂量组、扑尔敏组，分别给予相应的药物进行动物实验。采用ELISA法测定致敏大鼠血清IgE含量。采用RT-PCR方法，检测致敏大鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γmRNA、IL-4mRNA的表达水平。结果消敏颗粒可降低血清总IgE含量，可促进IFN-γ及mRNA表达，抑制IL-4mRNA表达（P<0.01或P<0.05），均有显著性差异。结论消敏颗粒具有抗Ⅰ型超敏反应的作用。

【关键词】消敏颗粒Ⅰ型超敏反应免疫球蛋白Eγ干扰素白介素-4　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheimmunologicalmechanismofXiaomingranulesontypeⅠhypersensitivity.MethodsTosensitizeandleadratwiththemixtureof（OVA）andAI（OH）.TomaketheexperimentalanimalmodelfortypeⅠhypersensitivity.Dividetheanimalsforexperimentintogroupsrandomly,namednormalgroup，modelgroup，vacantcontrolgroup,Xiaomingranule（low-andhigh-dose）groups,chlorpheniraminegroup,andexperimentizetheanminalswithhomologousmedicationrespectively.TheIgEcontentinserumofsensitizedratswasmeasuredwithELISA.TLymphocytesinSensitizedratsmeasuredwithRT-PCR.ResultsXiaomingranulescoulddecreasethecontentofIgEinserum，increasetheexpressionofIFN-γmRNA，inhibittheexpressionofIL-4mRNA（P<0.01orP<0.05）.Theyallhadremarkabledifferences.ConclusionXiaomingranuleshastheeffectontheTypeⅠhypersensitivity.

　　Keywords：Xiaomingranules；TypeⅠhypersensitivity；IgE；IFN-γ;IL-4

　　Ⅰ型超敏反应是主要由IgE介导的速发型超敏反应，消敏颗粒在临床治疗慢性荨麻疹等Ⅰ型超敏反应性疾病取得良好的疗效，为了进一步研究其治疗机制，本文通过大鼠Ⅰ型超敏反应动物模型，观察抑制IgE产生的作用，探讨消敏颗粒抗Ⅰ型超敏反应的免疫调节机制。

　　1.1动物Wistar大鼠50只,体重200～220g，雄雌各半，购自辽宁中医药大学实验动物中心，分笼饲养于辽宁中医药大学实验动物中心实验室。随机分5组，即正常组、模型组、消敏颗粒低、高剂量组、扑尔敏组。

　　1.2药物消敏颗粒（由消敏饮制备），组方为黄芪20g，防风15g，当归15g，金银花15g，芥穗15g，蒺藜15g，甘草15g，购自辽宁中医药大学附属医院。生理盐水注射液，哈尔滨三联药业有限公司产品；扑尔敏，北京太平洋药业有限公司产品。

　　1.3试剂卵白蛋白，AI（OH）国药集团化学试剂公司产品；1gEELISA试剂盒，上海森雄公司分装；Trizol，invitrogen公司；DEPC，DNA-markerDL2000，Rt-pcr试剂盒，宝生物工程有限公司（TaKaLa）产品。

　　1.4引物序列设计本实验选用GAPDH（三磷酸甘油醛脱氢酶）为内参照，根据文献报道在IFN-γ，IL-4［1］，GAPDH序列5',3'分别设计上下游引物，并在美国国立生物信息中心基因库进一步核准大鼠基因全序列。目的基因及内参照GAPDH引物由北京华大基因中心合成，基因序列见表1。表1PCR引物（略）

　　1.5仪器

　　550号微孔板酶标仪（美国BIO-RAD公司生产）；酶标仪洗板机（美国BIO-RAD公司生产）；DY89-Ⅰ电动玻璃匀浆机（宁波新芝科器研究所生产）；BIOFUGE28RS低温高速离心机（德国HERAEUS生产）；PE9600PCR仪（美国PERKINELMER生产）；EPS-300电泳仪（上海天能生产）；DYCP-33A电泳槽（北京六一仪器厂生产）。

　　2.1消敏颗粒制备消敏饮取14剂，分别将药物混合后浸泡30min，煮沸后继续煎30min，共煎2次，合并2次煎液，并分别浓缩至糖浆状，再与糊精混合均匀，粉碎干燥，在阴凉干燥处保存，使消敏颗粒每克含生药1g。实验时将消敏颗粒浓度调配成为每毫升含生药1，3g。