隐孢子虫病研究现状

　　文献标识码　A　文章编号　1000-1492（2000）02-0083-06

　　虽然隐孢子虫（Cryptosporidiumspp.）发现于本世纪初期，但直到1976年才有人隐孢子虫感染的报道。由于免疫缺陷患者特别易感，常可导致死亡，因而80年代艾滋病的发现，对隐孢子虫感染的研究起了推动作用。现已证明，隐孢子虫感染广泛存在，是人类和幼畜腹泻的重要病原〔1～4〕。1987年笔者等报道我国的人隐孢子虫病以后，各地都有感染的报道〔5〕。根据形态学，隐孢子虫至少有6种：寄生于哺乳动物的小鼠隐孢子虫（C.muris）和小隐孢子虫（C.parvum），鸟类的贝利隐孢子虫（C.baileyi）和火鸡隐孢子虫（C.meleagris），爬虫类的蛇隐孢子虫（C.serpentis）以及鱼类的鱼隐孢子虫（C.nasorum）。此外，保留雷利隐孢子虫（C.wrairi）作为豚鼠宿主来源隐孢子虫的一个独立种名。人和哺乳动物的感染几乎均由小隐孢子虫所引起〔3,4〕。

　　Awad-el-Kariem等对不同地区和不同宿主来源的小隐孢子虫囊合子进行同工酶分型研究，发现葡萄糖磷酸异构酶和乳酸脱氢酶全部相同，但人和动物来源的囊合子的葡萄糖磷酸变位酶和己糖激酶则有所不同。因此，推测小隐孢子虫在人间和动物宿主间分别有其独立的传播循环〔6〕。应用rDNA测序和直接PCR分析，隐孢子虫将会有新种发现，而且小隐孢子虫可能并不是单一的种〔7～9〕。新近根据18SrDNA基因分析，发现一种适应于猫的隐孢子虫。它一般不在其他宿主中传播，具备一个独立种的条件，因此定名为猫隐孢子虫（C.felis）〔10〕。

　　1　感染与免疫〔11～13〕

　　隐孢子虫的囊合子有厚壁与薄壁2种：厚壁囊合子约占80%，对外环境的抵抗力很强，经粪便排出，感染新的宿主。薄壁囊合子约占20%，在肠道内脱囊造成自身感染，所以一次吞食少量的囊合子，就可引起严重的或持续性感染。实验证明，10个囊合子即可使幼猴感染；成人易感者的最小感染剂量约为30个囊合子〔14〕。

　　感染小隐孢子虫的实验动物很多，一般是幼仔或者免疫缺陷的动物。新生牛犊、羊羔和猪仔等感染出现临床腹泻，而小型实验动物，如小鼠、大鼠只有新生乳鼠才能感染。鸟类隐孢子虫感染须用雏鸟，可引起肺炎。

　　实验用囊合子通常置于2.5％重铬酸钾水溶液中4℃保存，一般可存活4个月以上。笔者曾用荧光染色法鉴别囊合子的生死，结果很满意：在不同波长的紫外线光源荧光显微镜下观察，活的囊合子被荧光素双醋酸盐（fluoresceinacetate）染成亮绿色，灭活的被propidiumiodide或溴化啡啶（ethidiumbromide）染成橙黄色（未发表资料，1991）。

　　小隐孢子虫主要侵犯空肠和回肠粘膜的上皮细胞，在吸收细胞顶部发育繁殖，引起粘膜炎症，造成绒毛损伤、萎缩和减少。感染动物的肠组织病变轻重与腹泻严重程度有关，但在患者并不一致。隐孢子虫病的腹泻发病机制尚不清楚，吸收不良和分泌增加可能同时存在。根据许多现象人们推测小隐孢子虫可能产生肠毒素，但实验未能证明。

　　小隐孢子虫可在多种传代或原代细胞培养中，完成其生活史。我们用人结肠上皮T84细胞培养，可发育至裂殖体，并观察到感染细胞的电位和生化的变化，肠上皮细胞的屏障功能受损，通透性增加，最终导致细胞死亡〔15,16〕。

　　不论人和动物的免疫功能正常与否，感染小隐孢子虫后，一般在第5～8天出现血清特异性抗体，包括IgG、IgM、IgA和IgE，第15天达高峰。IgM、IgA持续数周后大都消失，IgG则长期存在。此外，唾液和十二指肠液还有分泌性抗体IgA；粪便中可测出IgA，还有IgG和IgM〔17,18〕。

　　正常人的血清抗体对于清除和预防感染可能起重要作用。然而，有些患慢性隐孢子虫感染的艾滋病患者，血清中有高滴度特异性IgG和IgM，说明抗体不能阻止感染持续，体液免疫不是清除感染的唯一机制。T细胞特别是CD4＋，在感染的康复和保护性免疫中具有至关重要的作用。正常宿主感染隐孢子虫一般呈自限性，并产生稳固的免疫力。先天性或获得性细胞免疫和体液免疫的缺损，如艾滋病、先天性低丙种球蛋白血症、调理素缺乏和补体缺陷，以及化疗或辐射引起的免疫抑制均是易感因素，可导致严重感染和慢性化，甚至致命。免疫抑制治疗引起的慢性感染，在免疫恢复后，感染可以痊愈。

　　营养不良的儿童对隐孢子虫易感，而且病情较重，腹泻病程延长，易呈慢性倾向，甚至引起死亡。免疫抑制大鼠给予低蛋白膳食对隐孢子虫感染的易感性增加。在发展中国家，营养不良与隐孢子虫感染具有交互作用，对儿童生长发育产生不良影响〔13〕。

　　牛犊和其它家畜的隐孢子虫感染大都发生在出生后3周内，胎传和初乳所含的特异性抗体似不足以预防感染。新生小鼠可引起临床型感染，甚至死亡，3～4周时抵抗力显著增强；成年小鼠则不感染。鸟类隐孢子虫病亦主要发生于雏鸟，成鸟有较强的抵抗力。环磷酰胺处理或去胸腺的成年大鼠对感染亦有明显的抵抗力（笔者未发表资料，1991）。

　　新生牛犊感染可能产生免疫耐受。成年宿主对隐孢子虫的抵抗力，部分可能由于先前感染获得的免疫。但是许多实验表明，这种与年龄有关的抵抗力，很难完全用特异性免疫解释。

　　2　诊断〔2,12,19,20〕

　　2.1　临床表现　人感染是否出现临床症状和病情轻重主要取决于个体的免疫状态。免疫正常人感染的主要临床表现为水泻，偶可带有粘液，但不含白细胞或血液；部分伴有恶心、呕吐、腹痛和发热；少数患者可无腹泻。Roberts等报道，对169例“消化不良”患者采取十二指肠液检查，发现12.4%含有囊合子，但仅3人有腹泻。

　　隐孢子虫病是HIV感染并发腹泻的首位原因，严重慢性腹泻大多发生于CD+4细胞显著减少者，并常因此导致死亡。应用细胞毒性药物和免疫抑制化疗者，癌症、白血病和器官移植的患者，合并隐孢子虫感染的严重性取决于免疫能力是否能够恢复；有些感染即使严重，但停止化疗可获痊愈。我们观察到癌症化疗患者的隐孢子虫感染在化疗结束后痊愈。儿童营养不良以及某些病毒性感染，如麻疹、水痘和巨细胞病毒感染，亦可因暂时免疫抑制对隐孢子虫易感，引起严重慢性腹泻。

　　免疫抑制特别是艾滋病患者的隐孢子虫感染可以广泛播散，出现胆道、胰管或呼吸道等胃肠道外隐孢子虫感染，表现为胆囊炎、硬化性胆管炎、胰腺炎和肺炎；婴儿尚有急性喉气管炎。

　　2.2　实验室诊断

　　2.2.1　粪便检查　隐孢子虫感染诊断主要根据粪便涂片检出囊合子。染色技术很多，改良抗酸染色法应用最广。粪便标本抗酸染色，囊合子呈桃红色，圆形或略带卵圆形，直径平均4.5～5.5μm，发育成熟的可见其中有4个纺锤状子孢子。如未作进一步鉴定，可诊断为小隐孢子虫或隐孢子虫。

　　在涂片上囊合子的形态可有变异，染色深浅不等；此与其发育阶段或生死有关。粪便中的酵母和念珠菌可与囊合子混淆，但不耐酸洗，复染一般成淡蓝色。如复染过度亦可染成红色，但它们一般较大（6～10μm），细心观察不难鉴别。