隐孢子虫病的病原学诊断及病例对照研究

作者：卢良安张文生李碧波凡遵志蒋朝辉

　　[摘要]目的为了验证接触动物、营养不良与隐孢子虫病感染有显著的统计学联系，探讨隐孢子虫病的病原学诊断方法。方法根据随机化的原则，在湖南省湘南地区用改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊，以卵囊阳性为病例，卵囊阴性者为对照。将同一粪便标本一式二份，分别用碘染色法和改良抗酸染色法进行对比测试。结果接触动物者感染隐孢子虫的aOR=3.74，aOR=3.14。营养不良者感染隐孢子虫的aOR=4.66，aOR=4.35。碘染色法检出卵囊41例，阳性率1.9%，改良抗染色法检出卵囊41例，阳性率1.9%，符合率为100%。结论动物是人感染隐孢子虫的最重要传染源，接触动物是隐孢子虫感染的最重要的危险因素。营养不良所致的继发性细胞免疫功能缺陷及胃肠道形态学的功能变化，是造成易感染隐孢子虫病的危险因素。碘染色法简便，可靠，是检测粪便中CSO较理想的方法。

　　[关键词]隐孢子虫卵囊；隐孢子虫病；染色法；接触动物；营养不良

　　[Abstract]purposeForthesakeoftheanimal,malnutritionoftheverificationcontactandconcealedsporeinsectdiseaseinfectionhavealreadyshownZhaoofstatisticslearncontact,studyconcealedsporeinsectdiseaseofthecauselearndiagnosismethod.MethodAccordingtotherandomprincipleforturn,inHunanprovinceXiangsouththeregionuseimprovementanti-sourdyemethodexaminationconcealedsporeinsecteggbag,witheggbagmasculinegenderforcase,eggbagfemininegenderforcheckagainst.Sameexcrementspecimenonethetypebe2anduseiodinetodyeamethodrespectivelyandimprovementtheanti-besourdyeingmethodtocarryoncontrasttest.ResultThecontactanimalinfectionconcealedsporeinsectofaOR=3.74,aOR=3.14.TheaORoftheinfectionconcealedsporeinsectofthemalnutrition=4.66,aOR=4.35.Iodinesdyingmethodcheckaneggbagis41,masculinegendertheratebe1.9%,improvementanti-dyemethodchecktheeggbagbe41,masculinegendertheratebe1.9%andmatchtherateas100%.ConclusionTheanimalisapersontheinfectionconcealedsporeinsectofmostimportanceinfectionsource,contacttheanimalbemostaconcealedsporeinsectinfectionimportanceofdangerousfactor.Malnutritionwiththeresultthatoflearnafterthehairfunctionblemishofthecellimmunityandthestomachandintestineswayappearanceoffunctionvariety,isresultineasyinfectionconcealedsporeinsectdiseaseofdangerousfactor.Theiodinedyeamethodsimple,credibility,isexaminationtheCSOintheexcrementmoreidealofmethod.

　　[Keywords]Cryptosporidiumoocysts;Cryptosporidiosis;Dyeamethod;Contactanimal;Malnutrition

　　隐孢子虫是多种动物，特别是人类和犊牛的广泛而重要的腹泻病原。隐孢子虫病是一种世界性的人兽共患病，本病还作为人体爱滋病的常见并发症而被重视。自Nime（1976）报道第一例人体隐孢子虫感染以来[1]，国外对该虫展开了多方面的研究，国内于1987年韩范首次报道人体病例[2]。嗣后，国内也有人、畜隐孢子虫病的报道[2-4]，认为隐孢子虫是胃肠炎的重要病原之一。1991年我们在进行人群隐孢子虫病流行病学调查时，发现接触动物、营养不良与隐孢子虫病感染有显著的统计学联系[6]。为了验证，我们进行了病例对照研究。同时选择其中2134粪便标本一式二份，用改良抗酸染和碘酒染色二种染色方法检查，共发现41例隐孢子虫感染者。现将染色方法、试剂配制、隐孢子虫卵囊形态和病例对照研究介绍如下：

　　1材料和方法

　　1.1病例对照研究材料与方法选择湖南省安仁县、耒阳市、攸县三个现场点，不论居民有无腹泻史均进行粪便检查。根据随机化的原则，对城镇以居民街道，农村以村为单位整群抽样。安仁县2562人，耒阳747人，攸县六田镇430人。采用改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊，以抽样调查中发现的71例隐孢子虫卵囊阳性病例，从同一单位或同村中，选择民族、性别、职业相同而年龄相差小于5岁的隐孢子虫卵囊阴性者为对照，病例和对照用同一份调查表进行流行病学分析。

　　1.2试剂

　　1.2.12%碘染色液。

　　1.2.2石炭酸复红染色液。

　　1.2.310%（V/V）硫酸水溶液。

　　1.2.42%孔雀绿液，作10倍稀释后为应用液。

　　1.3隐孢子虫卵囊鉴定标准

　　1.3.1碘染色法[7]卵囊形态呈暗淡的圆形小体，大小4-5μm，其内部有凹陷的或呈的实心小圆体，不着色，而粪便中的酵母菌及粪渣着棕黄色。

　　1.3.2改良抗酸染色法[8]卵囊呈圆形或椭圆形，玫瑰红色，内含若干月牙形有条索状孢子及棕褐色的残余体，背景为蓝绿色。

　　2操作步骤

　　2.1碘染色法将被检粪便涂成亚厚片（稀便直接涂片），滴加2%碘染色液1～2滴，1～2分钟，光学显微镜高倍镜观察。

　　2.2改良抗酸染色法将被检粪便涂成亚厚片（稀便直接涂片）。自然干燥或37℃下干燥。滴加甲醇固定5分钟，或火焰固定。滴加石炭酸复红染色液于粪膜上，2～15分钟，水洗。滴加10%（V/V）硫酸水溶液，3～10分钟，水洗。滴加孔雀绿液，1分钟，水洗，待干。光学显微镜油镜观察。

　　2.3病例和对照用同一份调查表进行流行病学调查。

　　3.1病例对照研究结果

　　3.1.1成组分析表明，接触动物与隐孢子虫感染有明显的联系，x2MH=8.64，P0.001，=3.74，aOR95%可信限：1.55，9.05；分层分析，x2MHS=7.09，P0.001，aOR=3.14，aOR95%可信限：1.41，6.99。

　　3.1.2营养不良与隐孢子虫感染成组分析表明营养不良与隐孢子虫感染有显著关系，x2MH=17.52，P0.001，aOR=4.66，aOR=95%可信限：2.26，9.61；分层表明，x2MHS=17.06，P0.001，aOR=4.35，aOR=95%可信限：2.18，8.68。

　　3.2碘染色法结果

　　我们通过对2134粪便标本一式二份，分别用碘染色法和改良抗酸染色法进行对比测试，碘染色法检出卵囊41例，阳性率1.9%，改良抗染色法检出卵囊41例，阳性率1.9%，符合率为100%，所以，我们认为本方法简便，结果可靠，值得推广应用。

　　本次共发现卵囊阳性41例，年龄最小的为4个月，最大的为56岁，他们的主要临床症状为腹泻（占78%）、腹痛（占36%）、呕吐（占19.2%）、发热（占49.3%）、口渴（占37%）、乏力、食欲减退等。腹泻5天以上者36例，间歇性腹泻为常见。病程最短的1周，最长1年左右，一般为1～2月。大便每天5次以上占多数，多则10余次。

　　4.1接触动物者感染隐孢子虫的aOR=3.74，aOR=3.14，二者值几乎相等。营养不良者感染隐孢子虫的aOR=4.66，aOR=4.35二值也几乎相等。表明：接触动物与营养不良相互间既无混杂作用，亦无交叉作用，而都有单个作用。由此说明，接触动物、营养不良与隐孢子虫感染之间的联系具有普遍性和特异性。动物是人感染隐孢子虫的最重要传染源，接触动物是隐孢子虫感染的最重要的危险因素[6]。营养不良所致的继发性细胞免疫功能缺陷及胃肠道形态学的功能变化，是造成易感染隐孢子虫病的危险因素。

　　4.2对隐孢子虫卵囊检验的认识

　　隐孢子虫卵囊呈圆形，大小2～6μm，囊内含有子孢子，对碘不着色。因形态与酵母菌相似，粪检时易与呈酵母菌混淆而造成误诊[8]。我们采用碘染色法，显微镜高倍直接观察：隐孢子虫卵囊呈暗淡的圆形小体，其内部有凹陷的或呈单侧的实心小圆形，不着色，易与呈棕黄色的酵母菌及粪渣区别。

　　4.3对隐孢子虫肠炎诊断的认识

　　隐孢子虫肠炎系新进认识的人畜共患传染病，目前隐孢子虫已从不引人注目的动物病原体一跃而成为人类肠炎的主要病因。其病原诊断检查主要是粪检，需染色才易显示，在10余种染色中，首推改良抗酸染色法[8]。本文结果表明：碘染色法可代替改良抗酸染色法，该法更简单、快速，适合各基层医院作为常规实验，值得推广应用。

　　4.4隐孢子虫病的发病情况及特点

　　隐孢子虫感染在不发达地区很常见，主要是小儿，占小儿腹泻的3%～13%[9]。本病临床缺乏明显的特征，临床主要表现为腹泻、发热、呕吐、腹痛、口渴。粪便中无有形成份，与其他病原体引起的肠炎，在症状和体征上无明显区别，但经抗肠炎药物治疗无效时，应疑为隐孢子虫病，需取大便或呕吐物进行隐孢子虫卵囊的检查，及早确诊，给予治疗。

　　参考文献

　　[1]倪小平,谢鹏典.隐孢子虫病的流行病学研究进展.国外医学寄生虫病分册,1989,5:207-210.

　　[2]韩范,谭渭仙,周性兰.南京地区人体隐孢子虫病2例报告.江苏医药,1987,12（6）:692.

　　[3]苏庆平.等.福州地区婴幼儿隐孢子虫病.中国人兽共患病杂志,1989,5（5）:35-36.

　　[4]管京生.等.婴幼儿隐孢子虫病.中国儿科杂志,1990,28（1）:41-45.

　　[5]卢良安.等.小儿隐孢子虫病二例.湖南医学,1990,（2）:10.

　　[6]卢良安,等.人兽隐孢子虫病在湖南的发现与流行病学调查.中国人兽共患病杂志,1992,2（8）:271-274.

　　[7]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程（第三版）.南京:东南大学出版社,2006:307.

　　[8]韩范.许生.隐孢子虫病的病原诊断.中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1990,7（1）:21-23.

　　[9]郑成中,李少明,崔凤文.小儿隐孢子虫病的实验诊断研究.中华儿科杂志,2000,6:38-41.